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作者

毛延芳

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

李雪莉

学位年度

2014

学位授予单位

泰山医学院

关键词

帕金森 MPTP 黄芩茎叶总黄酮 神经元凋亡

分类号

R742.5

摘要

目的：通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）建立帕金森小鼠模型，观察对比各组小鼠的行为学改变及其中脑神经元凋亡的程度，探讨黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对MPTP造成的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制，并对SSTF的治疗效果进行评价，以期为SSTF治疗帕金森病的临床应用奠定一定的理论基础。方法：一：实验分组及MPTP帕金森小鼠模型的建立。实验动物为8-10周龄健康雄性C57BL/6J小鼠32只，随机分为4组。（1）A组：空白对照组，每天不予任何特殊处置。（2）B组：MPTP模型组，从实验第4天起，每天经腹腔注射25mg/Kg的MPTP，2h后给予等量生理盐水腹腔注射1次，连续5天。（3）C组：SSTF预处理组，从实验第1天起，经腹腔注射给予SSTF1次/天，连续3天，从第4天起，给予小鼠腹腔注射SSTF2h后腹腔注射MPTP1次，连续5天。（4）D组：SSTF治疗组，从实验第4天起，经腹腔注射给予小鼠MPTP2h后腹腔注射SSTF1次/天，连续5天。二：小鼠行为学检测。每日观察小鼠行为学改变并按标准对实验小鼠震颤麻痹、悬挂实验、爬杆实验进行记录评分。...更多

目的：通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）建立帕金森小鼠模型，观察对比各组小鼠的行为学改变及其中脑神经元凋亡的程度，探讨黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对MPTP造成的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制，并对SSTF的治疗效果进行评价，以期为SSTF治疗帕金森病的临床应用奠定一定的理论基础。方法：一：实验分组及MPTP帕金森小鼠模型的建立。实验动物为8-10周龄健康雄性C57BL/6J小鼠32只，随机分为4组。（1）A组：空白对照组，每天不予任何特殊处置。（2）B组：MPTP模型组，从实验第4天起，每天经腹腔注射25mg/Kg的MPTP，2h后给予等量生理盐水腹腔注射1次，连续5天。（3）C组：SSTF预处理组，从实验第1天起，经腹腔注射给予SSTF1次/天，连续3天，从第4天起，给予小鼠腹腔注射SSTF2h后腹腔注射MPTP1次，连续5天。（4）D组：SSTF治疗组，从实验第4天起，经腹腔注射给予小鼠MPTP2h后腹腔注射SSTF1次/天，连续5天。二：小鼠行为学检测。每日观察小鼠行为学改变并按标准对实验小鼠震颤麻痹、悬挂实验、爬杆实验进行记录评分。三：实验标本的制作。将麻醉后的小鼠行心脏灌注。清洗和固定后断头取脑，切取小鼠中脑组织制作石蜡切块后保存备用。四：组织切片经过烤片、脱蜡、水化及抗原修复后，按说明书步骤行TH、Bcl-2、caspase-3和GFAP的免疫组化染色，倒置显微镜下观察各个分组的细胞形态并进行免疫阳性细胞计数。结果：一：B组（MPTP模型组）小鼠注射MPTP3-5min后均出现身体震颤、运动迟缓、弓背、步宽增加、步态不稳、竖尾、竖毛等行为学改变。持续30分钟左右症状开始减轻，24小时后基本恢复正常。于B组对比，C组（SSTF预处理组）和D组（SSTF治疗组）小鼠症状均有不同程度减轻，持续时间相对缩短。二：（1）震颤评分，悬挂能力和爬杆能力的测试结果均显示，C组与D组能明显改善小鼠运动协调能力，与B组（MPTP模型组）的差值均具有统计学意义（P<0.05）。与A组（空白对照组）相比仍有统计学差异（P<0.05）。C组与D组对比均无统计学差异（P>0.05）。随着给药次数的增加，每天的差值无统计学意义（P>0.05）。二：（1）TH免疫化学染色结果显示，A组可见大量TH阳性神经元，轴突明显，形态正常。B组TH阳性神经元数量明显减少，C、D两组TH阳性神经元数量较B组增加，较A组仍有差别，差值均具有统计学意义（P<0.05）。C、D两组对比无统计学差异（P>0.05）,B组细胞形态改变明显，胞体肿胀并轮廓不清，轴突减少或消失。（2）Bcl-2染色结果显示，A组阳性细胞数最多，棕黄色染色较深。B组阳性细胞数量明显减少， C、D两组阳性细胞数较B组明显增多，与正常组相比仍有差别，差值均具有统计学差异（P<0.05）, C、D两组对比无统计学差异（P>0.05）。（3）caspase-3免疫化学染色结果显示，B组的阳性细胞数比A组显著增多，差值具有统计学意义（P<0.05）。C组、D组阳性细胞数较B组明显减少，差值具有统计学意义（P<0.05），与A组相比阳性细胞数增加，有统计学差异（P<0.05）。C、D两组对比差值无统计学意义（P>0.05）。（4）GFAP免疫化学染色结果显示，B、C、D组阳性细胞数均有不同程度增加，与A组对比，有统计学差异（P<0.05）。B组GFAP阳性细胞数最多，与C、D两组的差值具有统计学意义（P<0.05）。C、D两组对比差值无统计学意义（P>0.05）。B、C、D组细胞的形态均发生改变，染色与A组对比有不同程度的加深。结论：（1）SSTF可明显改善MPTP帕金森小鼠的症状。（2）SSTF可明显抑制MPTP帕金森小鼠中脑黑质神经元的凋亡。（3）相比后治疗小鼠，预防性使用SSTF的MPTP帕金森小鼠的症状无明显的改善。（4）相比后治疗组，预防性使用SSTF并不能更好的抑制帕金森小鼠中脑黑质神经元的凋亡。（5）SSTF在治疗帕金森病方面具有广阔的研究前景。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

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