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作者

王琳

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王德才，窦桂芳

学位年度

2014

学位授予单位

泰山医学院

关键词

重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白 药代动力学 酶联免疫吸附测定

分类号

R96

摘要

目的：重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(E2HSA)临床前药代动力学研究。方法：建立化学发光酶联免疫检测法(CLEIA)测定猕猴血清中E2HSA的浓度并对其进行方法学确证；研究E2HSA在大鼠和猕猴体内的药代动力学特征；采用放射性同位素125I标记法对E2HSA在大鼠体内的组织分布和排泄特点进行研究。结果：1.测定生物样品中药物浓度的ELISA分析方法建立与确证该方法可特异性地识别E2HSA的抗原表位，在2~200ng·mL-1的浓度范围时与血清中其它物质无明显交叉反应。方法学确证表明标准品E2HSA在2~200ng·mL-1浓度范围内，吸光度与浓度呈依赖关系，四参数Logistic拟合：Y（OD值）=A2＋(A1-A2)/(1+(X/X0)^P)，相关系数r均大于0.99，最低定量限为2ng·mL-1。批间和批内精密度为1.3~8.1%，准确度为-3.6~2.3%。样品在-20℃放置3个月稳定性良好，储备液在-20℃放置7天稳定性良好，稀释1000倍无稀释效应。该分析方法能够满足E2HSA临床前药代动力学研究。2. Wistar大鼠、猕猴皮下注射E2HSA的药代动力学研究Wista...更多

目的：重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(E2HSA)临床前药代动力学研究。方法：建立化学发光酶联免疫检测法(CLEIA)测定猕猴血清中E2HSA的浓度并对其进行方法学确证；研究E2HSA在大鼠和猕猴体内的药代动力学特征；采用放射性同位素125I标记法对E2HSA在大鼠体内的组织分布和排泄特点进行研究。结果：1.测定生物样品中药物浓度的ELISA分析方法建立与确证该方法可特异性地识别E2HSA的抗原表位，在2~200ng·mL-1的浓度范围时与血清中其它物质无明显交叉反应。方法学确证表明标准品E2HSA在2~200ng·mL-1浓度范围内，吸光度与浓度呈依赖关系，四参数Logistic拟合：Y（OD值）=A2＋(A1-A2)/(1+(X/X0)^P)，相关系数r均大于0.99，最低定量限为2ng·mL-1。批间和批内精密度为1.3~8.1%，准确度为-3.6~2.3%。样品在-20℃放置3个月稳定性良好，储备液在-20℃放置7天稳定性良好，稀释1000倍无稀释效应。该分析方法能够满足E2HSA临床前药代动力学研究。2. Wistar大鼠、猕猴皮下注射E2HSA的药代动力学研究Wistar大鼠单次皮下注射1.98mg·kg-1E2HSA后， E2HSA在大鼠体内消除半衰期t1/2为：12.2±1.2h，平均滞留时间MRTlast为：34.9±1.9h；血浆清除率CL为：19.1±5.6mL·h-1·kg-1，表观分布容积Vd为：381.4±50.7mL·kg-1，AUClast为91652.8±8119.1ng·h·mL-1。猕猴单次皮下注射0.3、0.9和2.7mg·kg-1E2HSA后，E2HSA在猕猴体内消除半衰期t1/2依次为：53.4±8.0h、50.9±9.1h、56.8±8.1h，三个剂量组间没有统计学差异；平均滞留时间MRTlast依次为：78.3±6.2h、89.0±7.6h、83.3±7.7h；消除速率常数ke依次为：0.013±0.003、0.014±0.003、0.015±0.006；血浆清除率CL依次为：1.66±0.27mL·h-1·kg-1、1.39±0.15mL·h-1·kg-1、1.36±0.12mL·h-1·kg-1，低剂量组和中剂量组有统计学差异，中剂量组合高剂量组没有统计学差异，低剂量组和高剂量组有统计学差异；表观分布容积Vd依次为：125.5±8.8mL·kg-1、103.8±28.4mL·kg-1、110.4±12.2mL·kg-1三个剂量组间没有统计学差异；AUClast依次为179182±27148ng·h·mL-1，630956±68878ng·h·mL-1，1928196±168615ng·h·mL-1（比例1：3.5：10.8），低、中和高给药剂量比为1：3：9，AUClast与给药剂量基本呈等比例增加。猕猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次给药后，5只猕猴的蓄积因子（R）分别为0.91、1.07、0.80、0.62和0.63，平均蓄积因子0.81±0.19。猕猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA对静脉注射0.9mg·kg-1E2HSA的生物利用度为81.9%。3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的组织分布和排泄研究组织分布结果可见2h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清>肺>胃内容物>肾>脊髓>小肠内容物>肾上腺>胃>卵巢>心>膀胱>输精管>肝>脾>胰腺>皮肤>小肠>骨骼>子宫>输卵管>大肠>胸腺>睾丸>脑>肌肉>大肠内容物>脂肪。8h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清>肺>肾上腺>肾>胃内容物>卵巢>胃>小肠内容物>输卵管>心>输精管>肝>小肠>脾>脊髓>膀胱>睾丸>子宫>皮肤>胰腺>大肠>骨骼>脂肪>胸腺>脑>肌肉>大肠内容物。24h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清>胃内容物>皮肤>肺>膀胱>胃>输卵管>肾>卵巢>输精管>小肠>大肠内容物>肾上腺>心>子宫>肝>睾丸>脾>小肠内容物>大肠>骨骼>胰腺>脂肪>脊髓>胸腺>肌肉>脑。96h活杀后各组织的药物浓度顺序为：胃内容物>膀胱>血清>大肠内容物>脑>皮肤>肺>肾>肾上腺>输精管>肝>胃>卵巢>小肠内容物>输卵管>子宫>脊髓>心>小肠>脾>大肠>胰腺>睾丸>骨骼>胸腺>肌肉>脂肪。雄性Wistar大鼠在皮下给予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，0~144h内从胆汁排泄的药物量占总给药量的3.97±1.29%。0~432h内从尿液排泄的药物量占总给药量的62.86±10.47%。0~432h内从粪便中排泄的药物量占总给药量为14.47±4.37%，代谢笼沾染回收到总给药量的2.83%±0.63%。结论：1.测定生物样品中药物浓度的ELISA分析方法建立与确证建立了简单、灵敏、快速、可靠、特异性强的E2HSA全长药物检测方法，方法的特异性，准确度和精密度良好，符合生物分析方法指导原则要求。2. Wistar大鼠、猕猴皮下注射E2HSA的药代动力学研究E2HSA在猕猴体内消除半衰期t1/2三个剂量组间没有统计学差异；AUClast比例1：3.5：10.8，低、中和高给药剂量比为1：3：9，AUClast与给药剂量基本呈等比例增加，显示在0.3mg·kg-1~2.7mg·kg-1的剂量范围内E2HSA在猕猴体内的血清药物浓度呈线性动力学变化。猕猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次给药后，平均蓄积因子0.81±0.19，提示皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次后猕猴体内血药浓度不会积聚增加，其中部分猕猴血药浓度会降低，推测可能有抗体产生。猕猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA的绝对生物利用度为81.9%，说明皮下注射可能是一种较为快速、方便、有效的用药途径。3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的组织分布和排泄研究Wistar大鼠在皮下给予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，分别于2h、8h、24h、96h动物活杀后各组织酸沉后放射性结果显示：肾脏中药物含量一直较高，提示经尿排泄是一个主要的排泄途径；药物在脂肪、肌肉和脑组织中含量一直较低，说明E2HSA不易于进入脂性强的组织且不易透过血脑屏障；胃肠道中的含量一直较高，可能因为蛋白分解代谢中的碱性片段透过胃壁分泌到胃肠内容物中。胆汁、粪尿排泄结果显示：粪便、尿液和代谢笼沾染共回收到总给药量的80.16%，说明125I-E2HSA给药后主要经尿排出体外。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

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