获取途径

作者

王爱霞

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

靳卫国

学位年度

2013

学位授予单位

泰山医学院

关键词

趋化因子4 RNA干扰 EGFR 卵巢癌

分类号

R737.31

摘要

目的本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达，抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此，本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。方法扩增含CXCR4-shRNA质粒及空质粒载体，利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞，本实验分为3组，干扰组（转染CXCR4-shRNA的SW626细胞）、空载体组（转染空载体的SW626细胞）及空白对照组（不给予任何处理的细胞），转染48小时后，于倒置荧光显微镜下观察转染效率；利用酶标仪结合JC-1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化，采用实时定量RT-PCR法检测ASK1mRNA的表达情况。细胞免疫化学和/或Western Blot检测Caspase-3、EGFR、ERK1/2、p-C-Jun、Akt、TNF-α、NFκBp65、IκB-α蛋白的表达水平。结果1.转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率：当细胞处于对数生长期，状态良好，细胞汇合度达90%左右，按脂质体与质粒之比为1:1的比例进行转染，转染效率达到最高，人卵巢癌细胞SW62...更多

目的本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达，抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此，本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。方法扩增含CXCR4-shRNA质粒及空质粒载体，利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞，本实验分为3组，干扰组（转染CXCR4-shRNA的SW626细胞）、空载体组（转染空载体的SW626细胞）及空白对照组（不给予任何处理的细胞），转染48小时后，于倒置荧光显微镜下观察转染效率；利用酶标仪结合JC-1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化，采用实时定量RT-PCR法检测ASK1mRNA的表达情况。细胞免疫化学和/或Western Blot检测Caspase-3、EGFR、ERK1/2、p-C-Jun、Akt、TNF-α、NFκBp65、IκB-α蛋白的表达水平。结果1.转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率：当细胞处于对数生长期，状态良好，细胞汇合度达90%左右，按脂质体与质粒之比为1:1的比例进行转染，转染效率达到最高，人卵巢癌细胞SW626细胞的转染效率可达80%左右。2. JC-1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比，线粒体膜电位普遍降低（P<0.001），差异有统计学意义（P<0.05），而空白组与转染空载体组相比(P=0.234)，差异无统计学意义。3.运用Real time RT-PCR检测，干扰组与空载体组及空白对照组相比，ASK1mRNA的表达明显增多（P<0.001），差异有统计学意义。4.采用细胞免疫化学及Western blot蛋白印迹法，转染48小时后，干扰组与空载体组及空白对照组比较，CXCR4-shRNA干扰组细胞中EGFR蛋白及其下游信号分子ERK1/2、Akt、NFκBp65、TNF-α蛋白的表达较空白组及转染空载体组均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），干扰组中Caspase-3、p-C-Jun、IκB-α蛋白的表达显著提高（P<0.05），差异有统计学意义。结论CXCR4-shRNA促进细胞凋亡的分子机制可能是通过介导EGFR调控其下游信号因子，进而抑制肿瘤细胞生长。该分子机制的研究为今后卵巢癌的基因治疗提供分子生物学依据。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

38