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作者

宋学志 马贵亮 毛伟征

作者单位

青岛市市立医院普外科 泰山医学院

刊名

临床普外科电子杂志

年份

2016

卷号

第4卷

期号

第2期

页码

9-17

ISSN

2095-5308

关键词

溶瘤腺病毒 胃癌 肿瘤坏死因子-α 基因治疗

分类号

R735.2

摘要

目的研究TNF-α重组溶瘤腺病毒PPE3-F35-TNF-α对SGC-7901和MRC-5的体外杀伤作用。方法采用重组溶瘤腺病毒PPE3-F35-TNF-α和空载体腺病毒载体AD/CMV-EGFP感染胃癌SGC-7901细胞株和人成纤维细胞株MRC-5,通过TCID50法测定PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP的滴度及其体外繁殖能力;荧光显微镜下检测2组细胞中EGFP(绿色荧光蛋白)的表达;MTT法检测PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP对6组不同细胞杀伤情况;双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP的SGC-7901和MRC-5上清液中TNF-α表达量。结果病毒增殖实验结果显示48小时后在光镜下见PPE3-F35-TNF-α感染的SGC-7901出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),在荧光显微镜下观察到有明显的EGFP表达,7天后取以上细胞裂解液感染SGC-7901,结果显示用感染PPE3-F35-TNF-α的SGC-7901裂解液再次感染48小时后仍可见明显的CP...更多

目的研究TNF-α重组溶瘤腺病毒PPE3-F35-TNF-α对SGC-7901和MRC-5的体外杀伤作用。方法采用重组溶瘤腺病毒PPE3-F35-TNF-α和空载体腺病毒载体AD/CMV-EGFP感染胃癌SGC-7901细胞株和人成纤维细胞株MRC-5,通过TCID50法测定PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP的滴度及其体外繁殖能力;荧光显微镜下检测2组细胞中EGFP(绿色荧光蛋白)的表达;MTT法检测PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP对6组不同细胞杀伤情况;双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP的SGC-7901和MRC-5上清液中TNF-α表达量。结果病毒增殖实验结果显示48小时后在光镜下见PPE3-F35-TNF-α感染的SGC-7901出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),在荧光显微镜下观察到有明显的EGFP表达,7天后取以上细胞裂解液感染SGC-7901,结果显示用感染PPE3-F35-TNF-α的SGC-7901裂解液再次感染48小时后仍可见明显的CPE及EGFP表达,其他实验为阴性结果。MTT实验示不同滴度的PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP感染MRC-5及SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MCF-7、DCD1,7天后MTT法测定其细胞活力,结果表明PPE3-F35-TNF-α对MRC-5没有杀伤作用,而对SGC-7901均有明显的杀伤作用,而且杀伤作用与病毒浓度存在剂量依赖关系,AD/CMV-EGFP对以上肿瘤细胞都无明显的抑制作用;MOI为1的两种病毒分别感染上述细胞株后,在第3、5、7、9天测定细胞活力,结果显示PPE3-F35-TNF-α对肿瘤细胞的杀伤作用随作用时间增加而增强,而MRC-5的相对活力与感染时间不存在相关性。ELISA检测两组细胞上清液中TNF-α表达量示SGC-7901感染PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP后细胞上清液中TNF-α的表达量分别为(1463.44±53.47)pg/ml和(16.06±1.52)pg/ml(F=5849.310,P0.05),两组比较差异有统计学意义。结论 PPE3-F35-TNF-α能选择性增殖、杀灭胃癌细胞,同时大量表达具有抗胃癌作用的TNF-α,发挥多重抗瘤作用。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

29