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作者

左欢

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

牛敬忠

学位年度

2011

学位授予单位

泰山医学院

关键词

白花丹参 药理性预适应 细胞凋亡 Bax Bcl-2

分类号

R285.5

摘要

目的:观察预先给予不同浓度白花丹参带药血浆进行药理性预适应(pharmacological preconditioning,PPC)对体外培养的Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞活力及其凋亡调节蛋白(Bax、Bcl-2)表达的影响。初步探讨白花丹参根水提物作为药理性预处理物的可行性及其显效剂量,揭示白花丹参神经细胞保护作用的机制。方法:采用氧糖剥夺(oxygen-glucose deficiency,OGD)法建立体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞凋亡模型。将体外培养的Wistar乳鼠海马神经细胞随机分为白花丹参高(high,H)、中(medium,M)、低(low,L)剂量组及空白对照组(control,C组,即不含白花丹参的Wistar大鼠血浆培养液组)四个实验组,各组样本例数为6(n=6)。Wistar乳鼠海马神经细胞体外培养第8天,分别全量更换为高、中、低浓度白花丹参带药血浆及不含白花丹参Wistar大鼠血浆培养液培养,24小时后采用氧糖剥夺(OGD)法制作体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞凋亡模型,并进行相应实验指标的...更多

目的:观察预先给予不同浓度白花丹参带药血浆进行药理性预适应(pharmacological preconditioning,PPC)对体外培养的Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞活力及其凋亡调节蛋白(Bax、Bcl-2)表达的影响。初步探讨白花丹参根水提物作为药理性预处理物的可行性及其显效剂量,揭示白花丹参神经细胞保护作用的机制。方法:采用氧糖剥夺(oxygen-glucose deficiency,OGD)法建立体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞凋亡模型。将体外培养的Wistar乳鼠海马神经细胞随机分为白花丹参高(high,H)、中(medium,M)、低(low,L)剂量组及空白对照组(control,C组,即不含白花丹参的Wistar大鼠血浆培养液组)四个实验组,各组样本例数为6(n=6)。Wistar乳鼠海马神经细胞体外培养第8天,分别全量更换为高、中、低浓度白花丹参带药血浆及不含白花丹参Wistar大鼠血浆培养液培养,24小时后采用氧糖剥夺(OGD)法制作体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞缺血/缺氧损伤后细胞凋亡模型,并进行相应实验指标的检测。采用MTT比色法检测细胞活力,荧光显微镜Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡时相,荧光显微镜免疫荧光染色法检测凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2的表达。结果:①MTT比色法检测细胞活力结果显示:与空白对照组(C组)相比较,白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参低剂量组(L组)OD值分别为0.703±0.135(p <0.05),0.580±0.118(p <0.05),0.417±0.130(p>0.05);存活率分别为195.28(p <0.05)、161.11(p <0.05)、115.83(p>0.05)。与空白对照组(C组)相比较,白花丹参高剂量组(H组)及白花丹参中剂量组(M组)差异具有统计学意义(p <0.05)。②荧光显微镜免疫荧光染色法检测凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2结果显示:Bcl-2蛋白阳性染色主要位于神经细胞胞浆、核膜及突起中,为绿色荧光。空白对照组(C组)Bcl-2蛋白表达较少,荧光强度低;与空白对照组(C组)相比,白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参低剂量组(L组)Bcl-2蛋白表达明显增多,荧光强度增高,光密度值均有不同程度增高,差异具有统计学意义(P <0.05)。Bax蛋白阳性染色主要位于神经细胞胞浆、核膜和突起中,为绿色荧光。空白对照组(C组)Bax蛋白表达较多,荧光强度强;与空白对照组(C组)相比,白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参低剂量组(L组)Bax蛋白表达明显减少,荧光强度降低,光密度值均有不同程度降低,差异具有统计学意义(P <0.05)。③免疫荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示:凋亡早期细胞膜呈绿色荧光(FITC荧光);凋亡中晚期细胞核呈红色荧光(PI荧光),细胞膜呈绿色荧光(FITC荧光);凋亡晚期和死亡细胞只可见细胞核红色荧光(PI荧光),细胞膜崩解。空白对照组(C组)可见大量中晚期凋亡和死亡神经细胞。白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参低剂量组(L组)则以早期凋亡细胞为主,偶见凋亡中晚期细胞及死亡细胞。结论:1.不同剂量白花丹参药理性预适应对体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞具有保护作用,以白花丹参中剂量、高剂量的保护作用较为显著。2.不同剂量白花丹参药理性预适应对体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞的保护作用机制与增加Bcl-2表达,降低Bax表达有关。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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