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作者

米宁

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

高允生

学位年度

2011

学位授予单位

泰山医学院

关键词

甜菜碱 血管内皮细胞 细胞凋亡 Bcl-2 Bax

分类号

R965

摘要

目的探讨甜菜碱对HUVEC的氧化损伤是否具有保护作用,探讨HUVEC在氧化损伤条件下,甜菜碱对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响,对细胞中SOD活性和MDA含量及细胞培养上清中NO含量的变化,揭示甜菜碱发挥作用的机制,为评价甜菜碱的药用价值提供依据。方法应用胶原酶消化灌注法提取原代HUVEC,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法相结合进行鉴定,以确保内皮细胞的来源准确。细胞前两代进行实验。取对数生长期的细胞按如下分组进行处理:（1）正常对照组;（2） H2O2损伤模型组:H2O2 （ H2O2的浓度为1mmol/L）;（3）甜菜碱低剂量组:甜菜碱（9.3mg/L）+ H2O2;（4）甜菜碱中剂量组:甜菜碱（28mg/L）+ H2O2;（5）甜菜碱高剂量组:甜菜碱（84mg/L）+ H2O2;干预4小时后,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞增殖存活情况;应用流式细胞技术和AO、EB联合染色法观察各组细胞凋亡的情况;应用免疫细胞荧光技术和免疫细胞化学法检测各组细胞中Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的情况;利用试剂盒检测细胞中SOD的活性和MDA的含量以及细胞上清中NO的...更多

目的探讨甜菜碱对HUVEC的氧化损伤是否具有保护作用,探讨HUVEC在氧化损伤条件下,甜菜碱对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响,对细胞中SOD活性和MDA含量及细胞培养上清中NO含量的变化,揭示甜菜碱发挥作用的机制,为评价甜菜碱的药用价值提供依据。方法应用胶原酶消化灌注法提取原代HUVEC,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法相结合进行鉴定,以确保内皮细胞的来源准确。细胞前两代进行实验。取对数生长期的细胞按如下分组进行处理:（1）正常对照组;（2） H2O2损伤模型组:H2O2 （ H2O2的浓度为1mmol/L）;（3）甜菜碱低剂量组:甜菜碱（9.3mg/L）+ H2O2;（4）甜菜碱中剂量组:甜菜碱（28mg/L）+ H2O2;（5）甜菜碱高剂量组:甜菜碱（84mg/L）+ H2O2;干预4小时后,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞增殖存活情况;应用流式细胞技术和AO、EB联合染色法观察各组细胞凋亡的情况;应用免疫细胞荧光技术和免疫细胞化学法检测各组细胞中Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的情况;利用试剂盒检测细胞中SOD的活性和MDA的含量以及细胞上清中NO的含量变化,以此分析甜菜碱保护HUVEC氧化损伤的可能机制。结果1培养的细胞在倒置显微镜下观察可见细胞贴壁单层生长细胞多为梭形或多角形,呈现特征性“铺路石”样排列。Ⅷ因子抗体免疫荧光技术检测到95%以上的细胞发出黄绿色荧光,表明培养的细胞为血管内皮细胞。2形态学观察H2O2损伤组的细胞损伤明显,细胞大面积的脱落,经甜菜碱低、中和高浓度干预的细胞损伤情况有明显的改善,并且随着甜菜碱浓度的增高,细胞受损伤的程度越轻。MTT法结果表明,甜菜碱能明显的抑制HUVEC的减少,并呈现出一定的剂量依赖关系。3流式细胞技术检测甜菜碱中浓度和高浓度可以明显的抑制细胞的凋亡,AO、EB双染色的结果基本与流式细胞技术检测的结果一致。4免疫荧光检测甜菜碱可以使氧化损伤细胞中的抑凋亡蛋白Bcl-2的表达明显增加而促凋亡蛋白Bax的表达明显减少,免疫细胞化学检测结果与免疫荧光结果一致。5甜菜碱使氧化损伤的细胞中SOD的活性明显升高而MDA的含量明显降低,使细胞上清中NO的含量明显增加。结论1甜菜碱可以有效的抑制HUVEC的凋亡,保护HUVEC的活性。2甜菜碱抑制细胞的凋亡机制与提高Bcl-2蛋白的表达和降低Bax蛋白的表达相关。3甜菜碱可以通过升高细胞中的SOD活力和降低MDA含量从抗氧化方面对抗H2O2诱导的细胞损伤,通过增加NO的产生对氧化损伤的细胞起到保护作用。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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