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作者

于连峰

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王昭金

学位年度

2010

学位授予单位

泰山医学院

关键词

碱性成纤维细胞生长因子 坐骨神经 脊髓前角运动神经元 降钙素基因相关肽 背根神经节 挤压损伤

分类号

R651.3

摘要

目的探讨坐骨神经损伤后,外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤局部、对应的背根神经节(DRG)、脊髓后角和脊髓前角神经元形态结构和CGRP变化的影响,为周围神经损伤后再生的分子机制提供形态学基础,也为临床治疗周围神经损伤提供理论依据。方法成年雄性Wistar(78只)大鼠随机分成正常组、阳性对照组(单侧坐骨神经损伤建立大鼠坐骨神经损伤模型)、bFGF组(单侧坐骨神经损伤,损伤后局部给bFGF,及术后隔日术侧腓肠肌注射bFGF)。大鼠分别存活1d、3d、7d、14d、21 d和28d,在各时间点灌注固定,取与坐骨神经对应的L4-6脊髓节段和相应的背根神经节(L4-6)以及损伤局部的坐骨神经,冰冻连续切片,然后分别用免疫荧光、免疫组化及尼氏染色等方法分别观察坐骨神经损伤局部、DRG(L4-6)、脊髓后角(L4-6)和脊髓前角(L4-6)神经元、神经纤维的变化,CGRP免疫阳性细胞和纤维的变化以及CGRP的积分光密度值和前角运动神经元平均直径的变化。结果1、bFGF对坐骨神经损伤后脊髓前角(L4-6)运动神经元的影响(1) Nissl染色坐骨神经损伤后可见术侧前角(L4-6)...更多

目的探讨坐骨神经损伤后,外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤局部、对应的背根神经节(DRG)、脊髓后角和脊髓前角神经元形态结构和CGRP变化的影响,为周围神经损伤后再生的分子机制提供形态学基础,也为临床治疗周围神经损伤提供理论依据。方法成年雄性Wistar(78只)大鼠随机分成正常组、阳性对照组(单侧坐骨神经损伤建立大鼠坐骨神经损伤模型)、bFGF组(单侧坐骨神经损伤,损伤后局部给bFGF,及术后隔日术侧腓肠肌注射bFGF)。大鼠分别存活1d、3d、7d、14d、21 d和28d,在各时间点灌注固定,取与坐骨神经对应的L4-6脊髓节段和相应的背根神经节(L4-6)以及损伤局部的坐骨神经,冰冻连续切片,然后分别用免疫荧光、免疫组化及尼氏染色等方法分别观察坐骨神经损伤局部、DRG(L4-6)、脊髓后角(L4-6)和脊髓前角(L4-6)神经元、神经纤维的变化,CGRP免疫阳性细胞和纤维的变化以及CGRP的积分光密度值和前角运动神经元平均直径的变化。结果1、bFGF对坐骨神经损伤后脊髓前角(L4-6)运动神经元的影响(1) Nissl染色坐骨神经损伤后可见术侧前角(L4-6)有些外侧群运动神经元呈圆形肿胀,核周Nissl小体开始溶解,并可见明显的胞核移位,胞质内可见有空泡变,一直持续到术后7d。术后14dNissl小体开始恢复,术后21d可见多数运动神经元Nissl小体重新出现,染色较深；术后28d与正常组接近。坐骨神经损伤局部给予bFGF, bFGF能促进Nissl小体溶解后的恢复。bFGF组,损伤后1d术侧前角(L4-6)外侧群部分运动神经元开始肿胀,并可见有Nissl小体溶解消失但不如阳性对照组明显,没见到明显的核移位,一直持续到损伤后7d；术后14d可见大量Nissl小体再生使细胞染色较深；术后21d术侧前角前外侧运动神经元的形态和平均直径与正常组接近,对侧前角运动神经元未见明显变化。(2) CGRP在脊髓前角(L4-6)的表达变化正常组动物脊髓前角(L4-6)内可见有CGRP免疫阳性运动神经元,免疫反应产物呈颗粒状或均质状分布于胞质中,胞核未见标记,主要见于脊髓前角的外侧群神经元,也有一些脊髓前角内侧群神经元呈CGRP阳性。坐骨神经损伤后1d可引起L4-6前角运动神经元CGRP的表达增加,术后7d达峰值,随后缓慢下降,至术后21 d接近正常。bFGF能促进坐骨神经损伤后L4-6前角运动神经元CGRP的合成。bFGF组术后1d术侧前角(L4-6)外侧群运动神经元呈CGRP阳性且染色较深；继而前角(L4-6)外侧群CGRP阳性细胞数目增多且染色更深,与对照组相比有明显差异；术后14d前角(L4-6)外侧群CGRP阳性细胞染色明显变浅,到28d接近正常。2. bFGF对坐骨神经损伤后脊髓后角CGRP阳性纤维的影响正常组脊髓后角CGRP免疫阳性纤维主要位于后角RexedⅠ和Ⅱ板层,也见于RexedⅢ和Ⅳ板层及Lissauer’s束,有许多粗细不等的CGRP阳性纤维从RexedⅠⅡ板层投射到RexedⅢ和Ⅳ板层。坐骨神经损伤后可引起脊髓后角(L4-6)CGRP阳性纤维密度降低。坐骨神经损伤后术侧脊髓后角(L4-6) CGRP阳性纤维的密度较正常组明显下降(P<0.05),主要见于Rexed I和Ⅱ板层；术后7dCGRP阳性纤维密度降至最低,仅见于RexedⅠ,Ⅱ板层；随后CGRP阳性纤维增多,但术后28dCGRP阳性纤维仍未达到正常水平。bFGF能促进坐骨神经损伤后脊髓后角(L4-6) CGRP阳性纤维的恢复。bFGF组术后1d,CGRP阳性纤维在RexedⅠ、Ⅱ板层所占区域较正常组明显减少(P<0.05),染色也有所下降；术后7dCGRP阳性纤维仅见于RexedⅠ、Ⅱ板层,且密度下降到最低；第14dCGRP阳性纤维明显增多,灰质后连合处也可见大量CGRP阳性纤维；第21dCGRP阳性纤维进一步增多,见于RexedⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ板层和灰质后连合处；术后28dCGRP阳性纤维的染色更明亮。3、bFGF对坐骨神经损伤后背根感觉神经元的影响(1)Nissl染色坐骨神经损伤后Nissl染色可见DRG内一些感觉神经元Nissl小体开始溶解,DRG(L4-6)神经元胞体肿胀,随后有些DRG(L4-6)神经元胞质中几乎见不到Nissl小体；术后14d有些DRG(L4-6)神经元Nissl小体开始恢复染色呈深蓝色；至28dDRG细胞数目仍未达到正常水平。bFGF能促进坐骨神经损伤后DRG (L4-6)中小型神经元Nissl小体溶解恢复。bFGF组术后也有DRG(L4-6)神经元Nissl小体溶解消失；术后14d中小型细胞数目较阳性对照组明显增加(P<0.05),且染色更深；术后21d细胞数目与正常组接近,DRG(L4-6)神经元呈深蓝色,但bFGF对大型感觉神经元作用不明显。(2)DRG内CGRP的表达变化正常组动物DRG内可见大量以中小型细胞为主的CGRP免疫阳性神经元,但也可见一些大型感觉神经元呈CGRP阳性,CGRP呈颗粒状均匀分布在胞浆中,细胞核未见标记,也可见到一些CGRP免疫阳性的神经纤维。坐骨神经损伤可引起DRG (L4-6) CGRP合成减少,坐骨神经损伤后术侧DRG (L4-6)内中小型细胞CGRP积分光密度值术后1d就明显低于正常组(P<0.05),一直到第7d降至最低,以后开始升高,但到第28d时仍明显少于正常组；CGRP阳性的大型细胞数目术后明显减少,其细胞数目在整个实验过程中没有明显变化且一直明显低于正常组。bFGF能促进DRG(L4-6)CGRP合成的恢复,坐骨神经损伤后3d,术侧DRG(L4-6)内中小型细胞CGRP积分光密度值明显低于正常组,第7d与阳性对照组类似都明显低于正常组；坐骨神经损伤后14d, CGRP的表达有所增加,至第21 d与正常组接近,明显高于阳性对照组。bFGF组术侧DRG (L4-6)大型神经元的数目和CGRP积分光密度值在整个实验过程中均明显低于正常组(P<0.05), bFGF组与阳性对照组相比没有明显差异。4、bFGF对坐骨神经损伤局部CGRP阳性纤维的影响正常坐骨神经未见或仅见少量CGRP阳性纤维,坐骨神经损伤后可见局部坐骨神经内CGRP阳性纤维增加,坐骨神经损伤后1d,阳性对照组未见CGRP阳性纤维在损伤局部表达；术后3d在损伤局部可见有大量粗细不等的断裂的CGRP阳性纤维；第7d较第3d明显减少；术后14d仅见有极少量的CGRP阳性纤维；第21d和28d在损伤局部几乎见不到CGRP阳性纤维。bFGF组术后1d在坐骨神经损伤局部可见大量粗细不等的断裂的CGRP阳性纤维；术后3d,在损伤局部依然可见大量CGRP阳性纤维；术后7d与3d比CGRP阳性纤维明显减少；术后14d、21d和28d几乎见不到CGRP阳性纤维。结论1、坐骨神经损伤可引起脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元发生Nissl小体溶解、对内侧群神经元无影响；坐骨神经损伤也可引起DRG (L4-6)感觉神经元Nissl小体溶解。2、坐骨神经损伤后可引起脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元CGRP合成增加,DRG(L4-6)部分大中小型感觉神经元CGRP合成减少。3、坐骨神经损伤后给以外源性bFGF能够促进脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元以及DRG(L4-6)中小型神经元CGRP勺合成；对坐骨神经损伤后DRG(L4-6)大型感觉神经元CGRP的表达变化无明显影响。4、外源性bFGF能够促进受损前角(L4-6)运动神经元和DRG(L4-6)中、小型感觉神经元的存活。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

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