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作者

吕昕刚

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

魏开斌

学位年度

2010

学位授予单位

泰山医学院

关键词

脊髓损伤 嗅鞘细胞 细胞培养 静脉移植

分类号

R651.2

摘要

脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后的神经再生及功能恢复一直是医学界的难题,近年来在细胞移植中,嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)以其独特的生物学特性和促进损伤脊髓轴突再生的作用成为最有前景的治疗方法之一。目前嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的方式以局部移植治疗为主,而以静脉移植治疗脊髓损伤的方式没有检索到相关的研究报道。目的探讨和研究嗅鞘细胞静脉移植治疗急性脊髓损伤的疗效(感觉运动功能恢复、神经纤维再生情况等)及可能的作用机制,为临床上治疗急性脊髓损伤提供一种简单易行的移植方法。材料与方法1.嗅鞘细胞的培养、纯化与鉴定：取两个月左右健康wistar大鼠的嗅球,雌雄不限,体重200-250g,进行OECs的原代培养、纯化,消化收集嗅鞘细胞,并用双苯亚甲胺进行核标记。2.脊髓半切损伤模型的制备、分组与移植治疗：40只健康成年Wistar大鼠,制备右侧T10脊髓半切损伤模型。将大鼠模型随机分为嗅鞘细胞髓内局部移植组(A组)、嗅鞘细胞静脉移植组(B组)、D/F12静脉移植组(C组)和空白对照组(D组)。3.脊髓损伤功能恢复的评价：移...更多

脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后的神经再生及功能恢复一直是医学界的难题,近年来在细胞移植中,嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)以其独特的生物学特性和促进损伤脊髓轴突再生的作用成为最有前景的治疗方法之一。目前嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的方式以局部移植治疗为主,而以静脉移植治疗脊髓损伤的方式没有检索到相关的研究报道。目的探讨和研究嗅鞘细胞静脉移植治疗急性脊髓损伤的疗效(感觉运动功能恢复、神经纤维再生情况等)及可能的作用机制,为临床上治疗急性脊髓损伤提供一种简单易行的移植方法。材料与方法1.嗅鞘细胞的培养、纯化与鉴定：取两个月左右健康wistar大鼠的嗅球,雌雄不限,体重200-250g,进行OECs的原代培养、纯化,消化收集嗅鞘细胞,并用双苯亚甲胺进行核标记。2.脊髓半切损伤模型的制备、分组与移植治疗：40只健康成年Wistar大鼠,制备右侧T10脊髓半切损伤模型。将大鼠模型随机分为嗅鞘细胞髓内局部移植组(A组)、嗅鞘细胞静脉移植组(B组)、D/F12静脉移植组(C组)和空白对照组(D组)。3.脊髓损伤功能恢复的评价：移植术后1天、1周、2周、3周、5周、7周、10周分别进行肢体运动功能评分(改良CBS评分)观察动物模型运动功能情况；术后5周、10周取材脊髓标本,先行大体形态学观察,再行HE染色和嗜银染色,观察脊髓损伤部位神经轴突的再生情况,免疫组化染色及荧光显微镜观察标记细胞在脊髓损伤部位的存活、分布情况。结果应用差速贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法培养出纯度较高的嗅鞘细胞,胞体为梭形、扁圆形和多突起形三种形态,呈NGFRP75和GFAP染色阳性反应。移植术后1-10周各时段,大鼠后肢运动功能均有不同程度的恢复,10周时A、B、C、D组CBS评分分别为8.2±1.874、14.60±3.273、35.90±2.234、35.80±4.290。3周后评分显示,B组和A组同C组和D组间比较,各时段的差别均有显著意义(P0.05)。HE染色和嗜银染色见B组和A组均有较多的再生轴突,并有神经纤维通过损伤区,A组再生的轴突多于B组,C组与D组仅有极少散在的再生轴突,无连续性神经纤维通过损伤区。免疫组化染色在损伤区可观察到存活的嗅鞘细胞,分布于整个损伤区,而在存活的数量上A组比B组多。结论1.差速贴壁和Ara-c抑制相结合的培养方法兼收了两者的优点,能获到较高纯度的嗅鞘细胞,满足细胞移植所用,实际应用效果好；2.嗅鞘细胞静脉移植治疗急性脊髓损伤,其疗效与髓内局部移植相似,受损神经功能有一定程度的恢复,且移植的嗅鞘细胞可在脊髓损伤区存活并迁移；3.嗅鞘细胞静脉移植操作简单易行,可多次重复治疗,并能避免再次手术造成的脊髓二次损伤及术后诸多并发症,有较好的临床推广和使用价值。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

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