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作者

路海

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

白波，宋文刚

学位年度

2009

学位授予单位

泰山医学院

关键词

吗啡 树突状细胞 阿片受体 细胞表型 白介素-12

分类号

Q42

摘要

目的 C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cell，BMDC）在体外用吗啡持续刺激，研究吗啡持续干预对小鼠树突状细胞成熟及其阿片受体表达产生的影响。 方法 1．C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞体外培养及处理：4～6周龄C57BL/6小鼠，雌雄不限，取骨髓，在体外进行树突状细胞培养。实验分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）实验对照组、LPS+10-6M吗啡组、LPS+10-8M吗啡组、LPS+10-10M吗啡组、LPS+10-12M吗啡组及空白对照组。各实验组于细胞生长1，3，5天分别加入吗啡，在第5天加入LPS，继续培养48h后，进行各项指标检测。在细胞培养过程中，倒置显微镜观察各组细胞形态的变化。 2．细胞表型测定：收集培养7天的细胞，加入相应的荧光抗体进行处理，流式细胞仪检测培养细胞中表型（CD11c、Ia、CD86）的变化。 3．白介素-12 （interleukin-12，IL-12）测定：留取培养7天后的细胞上清液，酶联吸附剂试验（ELISA）检测各组IL-12的变化。 4．纳洛酮阻断后...更多

目的 C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cell，BMDC）在体外用吗啡持续刺激，研究吗啡持续干预对小鼠树突状细胞成熟及其阿片受体表达产生的影响。 方法 1．C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞体外培养及处理：4～6周龄C57BL/6小鼠，雌雄不限，取骨髓，在体外进行树突状细胞培养。实验分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）实验对照组、LPS+10-6M吗啡组、LPS+10-8M吗啡组、LPS+10-10M吗啡组、LPS+10-12M吗啡组及空白对照组。各实验组于细胞生长1，3，5天分别加入吗啡，在第5天加入LPS，继续培养48h后，进行各项指标检测。在细胞培养过程中，倒置显微镜观察各组细胞形态的变化。 2．细胞表型测定：收集培养7天的细胞，加入相应的荧光抗体进行处理，流式细胞仪检测培养细胞中表型（CD11c、Ia、CD86）的变化。 3．白介素-12 （interleukin-12，IL-12）测定：留取培养7天后的细胞上清液，酶联吸附剂试验（ELISA）检测各组IL-12的变化。 4．纳洛酮阻断后检测细胞分泌IL-12的分泌：取10-10M吗啡组，在加入吗啡的同时加入阿片受体拮抗剂纳洛酮（naloxone，10-8M），于培养7天后收集上清，检测其中IL-12分泌的变化。 4．细胞中阿片受体表达的检测：收集培养及处理后第7天的细胞，应用逆转录-聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法，检测体外培养的小鼠树突状细胞中阿片受体mRNA表达的变化。 结果 1．细胞培养第7天，与空白对照组相比，LPS+吗啡组中树突状细胞的“树突”样形态更加典型，突起更多且较长，说明它们的成熟度相对较高。而LPS+吗啡组与LPS对照组相比，细胞形态上未见显著差异。 2．培养第7天的树突状细胞加入相应荧光抗体检测细胞表型，结果发现LPS+吗啡组树突状细胞的三种表型Ia，CD11c，CD86比空白对照组和LPS对照组显著升高结果有统计学意义（P0．05）。 3．在细胞培养的第7天收集细胞上清检测IL-12，结果发现LPS+吗啡组与空白对照组及LPS对照组相比，IL-12含量显著升高，结果有统计学意义（P0．05）。 4．在树突状细胞培养过程中，纳洛酮与吗啡同时加入，在培养的第7天收集细胞上清检测IL-12含量，结果发现LPS+吗啡+纳洛酮组中IL-12与LPS对照组和LPS+吗啡组相比显著降低，有统计学意义（P< 0．01）。 5．细胞培养的第7天，收集各组树突状细胞，检测细胞中三种阿片受体表达的情况，结果发现μ、δ、κ三种受体在树突状细胞均中有表达，且在吗啡持续刺激下阿片受体出现mRNA表达的下调。其中，在吗啡浓度10-12～10-6M范围时，μ阿片受体（mu opioid receptor，MOR）和κ（阿片受体（kappa opioid receptor， KOR）的mRNA下调水平表现出一定量效关系；δ阿片受体（delta opioid receptor，DOR） mRNA下调水平在吗啡浓度为10-10～10-6M范围时，表现出一定量效关系；同时，LPS+吗啡组（10-12～10-6M）的MOR和KOR mRNA水平与空白对照组和LPS对照组相比，均有显著下降（P<0．01），DOR mRNA水平在吗啡浓度为10-10～10-6M范围时，均比空白对照组和LPS对照组显著降低（P<0．01）。 结论 吗啡持续作用于小鼠BMDC，能够促进BMDC的成熟，表现为形态上、表型上向成熟方向转化，而且，吗啡持续作用下，BMDC中阿片受体mRNA的表达水平下调，并且其下调水平与吗啡浓度呈现负相关。吗啡持续作用下，BMDC分泌的IL-12增加。 本实验在体外用吗啡持续刺激小鼠BMDC，从形态、表型和功能上检测吗啡对DC成熟的影响，并在DC上检测到阿片受体的存在，证明阿片类物质除通过中枢神经系统调节免疫外，还可以直接作用于免疫细胞来调节免疫。本研究为进一步阐述吗啡对机体免疫系统的作用及可能的作用机制提供了实验资料，具有重要的理论意义。收起

文献类型

学位论文

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