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作者

王桂成

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

刘焕星，姜智

学位年度

2008

学位授予单位

泰山医学院

关键词

银杏叶提取物 内毒素 肺动脉 内皮细胞 肺动脉高压 肺损伤

分类号

R563;R285.5

摘要

目的：探讨银杏叶提取物复合硝基左旋精氨酸甲酯是否对内毒素即脂多糖导致的大鼠肺动脉内皮细胞损伤具有协同的保护作用。旨在指导临床用药，为临床上提供一种治疗由内毒素导致的肺损伤的有效的方法。 材料与方法： 1.大鼠肺动脉内皮细胞损伤的原代培养:利用大鼠肺动脉组织块贴壁法进行肺动脉内皮细胞的培养。 2.大鼠肺动脉内皮细胞损伤的鉴定 (1)倒置显微镜下形态观察单个细胞呈多角形、梭形，融合成片的细胞呈鹅卵石样，漩涡状排列。 (2)免疫荧光染色PAECs呈现明亮的黄绿色荧光，阴性对照组未出现上述表现。 3.试验分组:将4-6代细胞胰酶消化，细胞计数。以1×106细胞数接种于六孔板上共33孔，随机分成五组即空白对照组、LPS损伤组、硝基左旋精氨酸甲酯组，三个治疗水平(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)银杏叶提取物组，三个治疗水平(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)、硝基左旋精氨酸甲酯+银杏叶提取物组，三个治疗水平(0.1mmol/L+10μg/ml、0.2mmol/L+50μg/ml、0.4mmol/L+100μg/ml)，每组及各水平间设三个复孔，除空白对照...更多

目的：探讨银杏叶提取物复合硝基左旋精氨酸甲酯是否对内毒素即脂多糖导致的大鼠肺动脉内皮细胞损伤具有协同的保护作用。旨在指导临床用药，为临床上提供一种治疗由内毒素导致的肺损伤的有效的方法。 材料与方法： 1.大鼠肺动脉内皮细胞损伤的原代培养:利用大鼠肺动脉组织块贴壁法进行肺动脉内皮细胞的培养。 2.大鼠肺动脉内皮细胞损伤的鉴定 (1)倒置显微镜下形态观察单个细胞呈多角形、梭形，融合成片的细胞呈鹅卵石样，漩涡状排列。 (2)免疫荧光染色PAECs呈现明亮的黄绿色荧光，阴性对照组未出现上述表现。 3.试验分组:将4-6代细胞胰酶消化，细胞计数。以1×106细胞数接种于六孔板上共33孔，随机分成五组即空白对照组、LPS损伤组、硝基左旋精氨酸甲酯组，三个治疗水平(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)银杏叶提取物组，三个治疗水平(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)、硝基左旋精氨酸甲酯+银杏叶提取物组，三个治疗水平(0.1mmol/L+10μg/ml、0.2mmol/L+50μg/ml、0.4mmol/L+100μg/ml)，每组及各水平间设三个复孔，除空白对照组外其余各组均加入内毒素即脂多糖1μg/ml。脂多糖、银杏叶提取物、硝基左旋精氨酸甲酯与细胞共育24小时后检测指标。 4.各项指标的检测:流式细胞仪检测各组细胞中的硝基酪氨酸水平以反映过氧亚硝基阴离子的含量。南京建成试剂盒检测细胞培养上清中的乳酸脱氧酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、酶联免疫吸附试验检测细胞上清中的内皮素-1、白细胞介素-8。 结果：GbE+L-NAME组与相同药物浓度水平的GbE组和L-NAME相比较MDA、LDH均有明显的降低；SOD与两单独用药组比较明显升高，GbE+L-NAME组中三个药物浓度水平ET-1的浓度分别为(405.89±18.57)pg/ml、(395.92±14.67)pg/ml、(253.34±11.62)pg/ml与相同药物浓度水平GbE组(324.53±19.77)pg/ml、(217.39±15.32)pg/ml、(166.92±18.74)pg/ml相比有所升高，与相同药物浓度水平L-NAME组(467.8±17.94)pg/ml、(505.88±20)pg/ml相比显著降低，GbE+L-NAME组中三个药物浓度水平的NT％分别为(28.36±1.47)％、(16.94±1.13)％、(13.51±1.16)％比相同药物浓度水平GbE组(36.97±1.86)％、(23.44±1.4)％、(20.65±1.42)％和L-NAME组的(39.26±2.03)％、(33.7±1.94)％、(28.88±1.73)％显著降低。 结论： 1.脂多糖能够造成大鼠肺动脉内皮细胞损伤，这种损伤主要是由于氧化反应引起。 2.银杏叶提取物和硝基左旋精氨酸甲酯均能够减轻脂多糖导致的大鼠肺动脉内皮细胞损伤，但是硝基左旋精氨酸甲酯升高细胞培养上清中的内皮素-1，单独用药能加剧肺动脉高压的发生与发展，银杏叶提取物的使用可降低这种升高。 3.银杏叶提取物和硝基左旋精氨酸甲酯联合用药可更加有效的降低脂多糖造成的细胞损伤，降低由此引起的炎症反应，并能够提高细胞内超氧化物岐化酶的活性，更加有效的保护大鼠肺动脉内皮细胞。内皮素-1的变化可能提示银杏叶提取物在肺动脉高压的治疗过程中有一定的作用。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文