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作者

王克强 侯彦强 冉张申 李湘奇 段衍超

作者单位

上海交通大学附属第一人民医院松江分院检验科 泰山医学院附属医院检验科

刊名

中华诊断学电子杂志

年份

2015

卷号

第4期

页码

292-295

ISSN

2095-655X

关键词

γδΤ细胞 白细胞介素2 佛波醇酯类 离子霉素 结核杆菌低分子多肽抗原

分类号

R446.8

摘要

目的建立一种人外周血γδΤ细胞细胞内白细胞介素-2(IL-2)的检测方法。方法分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)刺激PBMC,获取较高比例的γδΤ细胞。用佛波醇酯+离子霉素(PMA+IM)刺激PBMC和γδΤ细胞,用蛋白转运抑制剂(Brefeldin A,BFA)阻断细胞内因子的分泌,用皂角素破膜,流式细胞术检测CD3+T细胞内CD69阳性率,以确定最佳的破膜时间,用流式细胞术检测γδΤ细胞内的IL-2的表达。不同组间CD3+T细胞内CD69阳性率及细胞内IL-2的阳性率比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用最小显著性(LSD)法检验.。结果刺激时间不同,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率表达不同,皂角素破膜时间为15 min时,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率最高,达(87.82±2.28)%,与处理5 min[CD69的阳性率(66.86±1.99)%]和25 min[CD69的阳性率(81.73±2.51)%]比较,差异有统计学意义(F=112.81,P<0.05);不同处理组γδΤ细胞内IL-2表达不同,γδΤ细胞受P...更多

目的建立一种人外周血γδΤ细胞细胞内白细胞介素-2(IL-2)的检测方法。方法分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)刺激PBMC,获取较高比例的γδΤ细胞。用佛波醇酯+离子霉素(PMA+IM)刺激PBMC和γδΤ细胞,用蛋白转运抑制剂(Brefeldin A,BFA)阻断细胞内因子的分泌,用皂角素破膜,流式细胞术检测CD3+T细胞内CD69阳性率,以确定最佳的破膜时间,用流式细胞术检测γδΤ细胞内的IL-2的表达。不同组间CD3+T细胞内CD69阳性率及细胞内IL-2的阳性率比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用最小显著性(LSD)法检验.。结果刺激时间不同,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率表达不同,皂角素破膜时间为15 min时,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率最高,达(87.82±2.28)%,与处理5 min[CD69的阳性率(66.86±1.99)%]和25 min[CD69的阳性率(81.73±2.51)%]比较,差异有统计学意义(F=112.81,P<0.05);不同处理组γδΤ细胞内IL-2表达不同,γδΤ细胞受PMA和IM刺激并有BFA存在时表达最高,达(50.65±6.25)%,与γδΤ细胞组(0.55±0.07)%、γδΤ细胞+PMA+IM组(0.91±0.12)%和PBMC+PMA+IM+BFA组(0.21±0.03)%比较,差异有统计学意义(F=321.07,P<0.05)。结论流式细胞术是一种检测γδΤ细胞内IL-2的较好方法,为γδΤ细胞内其他分子的检测分析奠定了方法学基础。收起

基金

山东省高等学校科技计划项目

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

24