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作者

徐英萍 王家富 李伟 宋文刚

作者单位

泰山医学院

刊名

中国组织工程研究与临床康复

年份

2008

卷号

第12卷

期号

第25期

页码

4887-4890

ISSN

2095-4344

关键词

蜕膜基质细胞 复合消化酶 体外培养 免疫组织化学

分类号

R329

摘要

目的:蜕膜组织的细胞成分相当复杂,其中蜕膜基质细胞约占全部蜕膜细胞数的75%,其能分泌多种细胞因子,既参与蜕膜营养供应作用又能调节蜕膜局部的免疫微环境。实验拟建立良好的小鼠子宫蜕膜基质细胞培养方法,为进一步建立蜕膜细胞共培养系统将为研究病理性妊娠打下良好的基础。方法:实验于2006-09/2008-01在泰山医学院实验动物中心,SPF级实验室完成。①实验材料:8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,由北京维通力化实验动物技术有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:选用孕龄6~8d的C57BL/6小鼠蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行全组分蜕膜细胞培养,采用原代细胞过夜换液方法清除红细胞、淋巴细胞和不贴壁的细胞成分,利用传3代方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯。纯化后,观察蜕膜基质细胞的生长变化规律,制作细胞爬片,用催乳素免疫组织化学试剂盒检测培养细胞的成分。结果:①小鼠蜕膜基质细胞在接种24h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状,一般培养5~7d后细胞融合成单层。原代培养的蜕膜基质细胞在含10%胎牛血清的培养液中可增生数周,四...更多

目的:蜕膜组织的细胞成分相当复杂,其中蜕膜基质细胞约占全部蜕膜细胞数的75%,其能分泌多种细胞因子,既参与蜕膜营养供应作用又能调节蜕膜局部的免疫微环境。实验拟建立良好的小鼠子宫蜕膜基质细胞培养方法,为进一步建立蜕膜细胞共培养系统将为研究病理性妊娠打下良好的基础。方法:实验于2006-09/2008-01在泰山医学院实验动物中心,SPF级实验室完成。①实验材料:8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,由北京维通力化实验动物技术有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:选用孕龄6~8d的C57BL/6小鼠蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行全组分蜕膜细胞培养,采用原代细胞过夜换液方法清除红细胞、淋巴细胞和不贴壁的细胞成分,利用传3代方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯。纯化后,观察蜕膜基质细胞的生长变化规律,制作细胞爬片,用催乳素免疫组织化学试剂盒检测培养细胞的成分。结果:①小鼠蜕膜基质细胞在接种24h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状,一般培养5~7d后细胞融合成单层。原代培养的蜕膜基质细胞在含10%胎牛血清的培养液中可增生数周,四五天传代1次,传代后的细胞形态无明显变化,而传代培养极性渐不明显。②免疫组织化学显示,体外培养传代后95%阳性细胞为蜕膜基质细胞,细胞大小形状基本均一,染色特点为胞质内可见细小的棕色颗粒,且越近胞核染色越深。结论:采用复合酶消化,换液传代方法提纯蜕膜组织,方法简单、经济实用,并可获得较高纯度的蜕膜基质细胞。收起

基金

山东省自然科学基金

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

34