人DNMT3B1原核表达载体的构建和表达
- 作者单位
- 泰山医学院附属医院神经内科 包头医学院生物医学研究中心 汕头大学医学院分析细胞学实验室
- 刊名
- 泰山医学院学报
- 年份
- 2011
- 卷号
- 第6期
- 页码
- 401-403
- ISSN
- 1004-7115
- 关键词
- DNA甲基化转移酶3B1 构建 鉴定
- 分类号
- Q78
- 摘要
- 目的构建人DNMT3B1原核表达载体,并进行初步表达。方法据Genebank中人DNMT 3B1 cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT 3B1,并将扩增产物克隆到原核表达载体PGEX-4T.3中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果 PCR扩增得到人DNMT 3B1的cDNA片段大小为2.6 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到原核表达载体PGEX-DNMT3B1I,PTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为100 kd。结论成功构建了人DNMT3B1原核表达载体并完成其在E.coli BL21(DE3)中的诱导表达,为进一步在体外研究DNMT3B异构体提供了条件。
- 基金 国家自然科学基金;内蒙古自然科学基金
- 文献类型
- 期刊
- 浏览量
- 29
-
被引次数
超星被引：2；
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