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作者

曲迅 宋文刚 邓文 李松 栾旭东 朱长军

作者单位

泰山医学院免疫教研室 Albert Einstein Medical College

会议名称

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

会议录

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编

会议地点

中国济南

召开年

2001

关键词

FHIT基因 克隆载体 逆转录病毒表达载体

摘要

目的肿瘤是一种多基因表达异常的疾病。迄今,人们已经发现上百种癌基因和几十种抑癌基因,这些基因的发现不仅为探讨肿瘤发病机理提供新的思路,同时也为肿瘤的基因治疗奠定理论基础。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因是Ohta等克隆的一个新的抑癌基因,大量研究表明FHIT基因在多种肿瘤均存在不同程度的缺失、突变。我们从人正常阑尾组织克隆出FHIT基因全长,并以此构建FHIT基因的逆转录病毒表达载体,为深入研究FHIT的抑癌作用提供可靠的分子工具。方法首先利用TRIzol试剂提取人正常阑尾组织总RNA,经逆转录反应得到cDNA库,再用FHIT基因的PCR引物扩增得到目的基因FHIT。使用pGEM-T easy vector system试剂盒构建FHIT的克隆载体pGEM-FHIT,经PCR扩增筛选,EcoRⅠ、HindⅢ酶切鉴定后进行DNA测序。将pGEM-FHIT与pLXSN质粒DNA分别进行EcoRⅠ完全酶切,回收纯化目的基因FHIT片段及载体pLXSN/EcoRⅠ片段,并用碱性磷酸酶对pLXSN/EcoRⅠ片段进行5’突出末端去磷酸化处理;以目的...更多

目的肿瘤是一种多基因表达异常的疾病。迄今,人们已经发现上百种癌基因和几十种抑癌基因,这些基因的发现不仅为探讨肿瘤发病机理提供新的思路,同时也为肿瘤的基因治疗奠定理论基础。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因是Ohta等克隆的一个新的抑癌基因,大量研究表明FHIT基因在多种肿瘤均存在不同程度的缺失、突变。我们从人正常阑尾组织克隆出FHIT基因全长,并以此构建FHIT基因的逆转录病毒表达载体,为深入研究FHIT的抑癌作用提供可靠的分子工具。方法首先利用TRIzol试剂提取人正常阑尾组织总RNA,经逆转录反应得到cDNA库,再用FHIT基因的PCR引物扩增得到目的基因FHIT。使用pGEM-T easy vector system试剂盒构建FHIT的克隆载体pGEM-FHIT,经PCR扩增筛选,EcoRⅠ、HindⅢ酶切鉴定后进行DNA测序。将pGEM-FHIT与pLXSN质粒DNA分别进行EcoRⅠ完全酶切,回收纯化目的基因FHIT片段及载体pLXSN/EcoRⅠ片段,并用碱性磷酸酶对pLXSN/EcoRⅠ片段进行5’突出末端去磷酸化处理;以目的基因与载体5:1(分子摩...收起

文献类型

会议论文

浏览量

7