牛脑皮层G_i的纯化及其与AC的偶联
- 作者单位
- 中国科学院生物物理研究所 生物大分子国家重点实验室
- 刊名
- 中国生物化学与分子生物学报
- 年份
- 1997
- 卷号
- 第3期
- 页码
- 350-355
- ISSN
- 1007-7626
- 关键词
- 抑制型G蛋白(Gi) 腺苷酸环化酶(AC) 牛脑 重建
- 分类号
- Q51
- 摘要
- 用1%胆酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两者分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋白(Gi)中除去,获得纯化的高活力的Gi,其GTP结合活力为17.6nmol/mg,比细胞膜Gi活力提高50倍;并具有较高的产率,从1g膜蛋白中可获得0.66mg的Gi,同时可获得无G蛋白污染的AC和少量的Gs蛋白.SDS-PAGE显示分子量为41000和36000的两条蛋白带,证实是Gi的α基和β亚基.进一步用重建脂酶体的方法检测Gi对AC的抑制作用,结果显示Gi对AC活力的抑制达40%左右,表明CAMP信息跨膜转导通路中Gi与AC之间具有较好偶联功能.
- 文献类型
- 期刊
- 浏览量
- 9
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