获取途径

作者

赵传喜

学位名称

硕士

导师姓名

曹莉莉

学位年度

2020

学位授予单位

山东第一医科大学

关键词

宫颈癌 Krüppel样因子14 细胞凋亡 细胞增殖

分类号

R737.33

摘要

研究背景及目的 Krüppel样因子属于锌指转录因子家族，该家族由17个已确认的成员组成，控制一些重要的细胞过程，如细胞的增殖、分化和迁移，且在肿瘤发生发展中发挥极其重要的作用。Krüppel-likefactors14是该家族成员之一，在宫颈癌发生发展中的作用及调控机制尚不清楚。本研究通过检测KLF14在宫颈癌细胞中的表达情况，过表达KLF14后检测对宫颈癌细胞增殖及凋亡的作用，探究KLF14促进宫颈癌细胞凋亡的分子机制，为KLF14在宫颈癌中的治疗提供理论基础。 研究方法 ①利用Oncomine网站分析KLF14在宫颈癌中的表达情况，并借助OncoLnc网站分析KLF14表达与宫颈癌患者存活率的关系。②构建过表达KLF14质粒和对照组质粒，在宫颈癌细胞Hela、C-33A细胞系中分别瞬时转染KLF14过表达质粒与对照组质粒，应用RT-PCR、Westernblot分别在mRNA、蛋白水平验证其转染效率，使用CCK-8实验检测KLF14对Hela、C-33A细胞增殖能力的影响，使用流式细胞术、线粒体膜电位检测KLF14对其细胞凋亡水平的影响。③在Hela细胞系中过表达KLF14后进行...更多

研究背景及目的 Krüppel样因子属于锌指转录因子家族，该家族由17个已确认的成员组成，控制一些重要的细胞过程，如细胞的增殖、分化和迁移，且在肿瘤发生发展中发挥极其重要的作用。Krüppel-likefactors14是该家族成员之一，在宫颈癌发生发展中的作用及调控机制尚不清楚。本研究通过检测KLF14在宫颈癌细胞中的表达情况，过表达KLF14后检测对宫颈癌细胞增殖及凋亡的作用，探究KLF14促进宫颈癌细胞凋亡的分子机制，为KLF14在宫颈癌中的治疗提供理论基础。 研究方法 ①利用Oncomine网站分析KLF14在宫颈癌中的表达情况，并借助OncoLnc网站分析KLF14表达与宫颈癌患者存活率的关系。②构建过表达KLF14质粒和对照组质粒，在宫颈癌细胞Hela、C-33A细胞系中分别瞬时转染KLF14过表达质粒与对照组质粒，应用RT-PCR、Westernblot分别在mRNA、蛋白水平验证其转染效率，使用CCK-8实验检测KLF14对Hela、C-33A细胞增殖能力的影响，使用流式细胞术、线粒体膜电位检测KLF14对其细胞凋亡水平的影响。③在Hela细胞系中过表达KLF14后进行基因转录组测序，筛选影响宫颈癌细胞凋亡的下游分子，并应用RT-PCR、Westernblot在mRNA以及蛋白水平进行验证。筛选出下游分子后构建其敲低质粒，在Hela、C-33A细胞系中与KLF14过表达质粒共转染后开展恢复实验，探究KLF14是否通过筛选的下游分子发挥促进宫颈癌细胞凋亡并达到抑制肿瘤发展的作用。 研究结果 我们利用Oncomine网站数据资源分析出KLF14在宫颈癌中的表达低于正常组织，利用OncoLnc网站数据资源分析发现KLF14高表达的患者存活率大约在3000天后稳定高于KLF14低表达的患者。体外实验分析KLF14在宫颈癌细胞中发挥作用，CCK-8实验结果表明KLF14能够明显抑制Hela、C-33A细胞的增殖。流式细胞术及线粒体膜电位实验结果发现KLF14促进Hela、C-33A细胞凋亡。利用基因转录组测序技术，我们发现KLF14过表达组与对照组相比共有20031个基因表达差异，显著性差异的基因共有862个基因，其中上调基因750个，下调基因112个。我们进行了三次生物学重复实验，对经典的凋亡相关基因CASP3、CASP9及在mRNA水平上差异条件为p＜0.05且差异倍数大于2的凋亡相关基因CASP10、CARD6在mRNA水平上进行验证，且通过查找大量文献及相关资料最终我们确定了casp10作为KLF14的下游靶基因。恢复实验证实KLF14并非通过调控cas10的表达抑制Hela和C-33A细胞的增殖，在Hela细胞中可能通过调控casp10的表达从而促进宫颈癌细胞凋亡，而在C-33A细胞中并非通过调控casp10的表达促进宫颈癌细胞凋亡，说明KLF14发挥作用的途径在不同来源的宫颈癌细胞系之间的存在差异。 结论 1.KLF14在宫颈癌中表达并可能影响宫颈癌的发生发展。 2.KLF14可以抑制宫颈癌细胞的增殖，促进宫颈癌细胞的凋亡，抑制宫颈癌的发展。 3.KLF14不通过casp10抑制宫颈癌细胞的增殖，可能通过casp10促进宫颈癌细胞凋亡。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

21