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作者

张伟

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

高允生

学位年度

2014

学位授予单位

泰山医学院

关键词

大鼠海马细胞 Hhcy 甜菜碱 细胞凋亡 神经保护 HE

分类号

R589

摘要

目的研究盐酸甜菜碱（Bet）对高同型半胱氨酸血症（HHcy）大鼠脑组织和原代海马细胞损伤的保护作用及其机制。通过对HHcy大鼠血浆及脑组织匀浆中的SOD活性、LDH活性、MDA、 NO及GSH含量进行测定，HE染色观察HHcy大鼠脑组织形态学等方法研究Bet的保护作用。体外实验通过检测细胞生长抑制率和凋亡率，采用试剂盒测定细胞上清液SOD活性、MDA含量、LDH活性和细胞凋亡，Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，探讨Bet拮抗Hcy致大鼠原代培养海马细胞损伤的作用机制。方法1Bet对HHcy大鼠脑组织的保护作用：采用2%蛋氨酸饲料喂养Wistar大鼠，制备大鼠高同型半胱氨酸血症模型。分组如下：正常对照组（标准饲料，生理盐水）、模型组（HHcy）（高蛋氨酸饲料，生理盐水），盐酸甜菜碱高、中、低浓度组(高蛋氨酸饲料，甜菜碱剂量200、100、50mg/Kg)，大鼠尾部取血离心取血清，检测大鼠血清同型半胱氨酸的含量。灌胃Bet60天后麻醉处死，检测血浆及脑组织匀浆SOD、MDA、NO、GSH、LDH及NO水平，HE染色观察大鼠脑组织形态学变化。2Bet对原代...更多

目的研究盐酸甜菜碱（Bet）对高同型半胱氨酸血症（HHcy）大鼠脑组织和原代海马细胞损伤的保护作用及其机制。通过对HHcy大鼠血浆及脑组织匀浆中的SOD活性、LDH活性、MDA、 NO及GSH含量进行测定，HE染色观察HHcy大鼠脑组织形态学等方法研究Bet的保护作用。体外实验通过检测细胞生长抑制率和凋亡率，采用试剂盒测定细胞上清液SOD活性、MDA含量、LDH活性和细胞凋亡，Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，探讨Bet拮抗Hcy致大鼠原代培养海马细胞损伤的作用机制。方法1Bet对HHcy大鼠脑组织的保护作用：采用2%蛋氨酸饲料喂养Wistar大鼠，制备大鼠高同型半胱氨酸血症模型。分组如下：正常对照组（标准饲料，生理盐水）、模型组（HHcy）（高蛋氨酸饲料，生理盐水），盐酸甜菜碱高、中、低浓度组(高蛋氨酸饲料，甜菜碱剂量200、100、50mg/Kg)，大鼠尾部取血离心取血清，检测大鼠血清同型半胱氨酸的含量。灌胃Bet60天后麻醉处死，检测血浆及脑组织匀浆SOD、MDA、NO、GSH、LDH及NO水平，HE染色观察大鼠脑组织形态学变化。2Bet对原代培养大鼠海马细胞的保护作用：采用低浓度胰蛋白酶消化静置提取海马细胞，高糖DMEM培养原代海马细胞的方法。原代海马细胞分组如下：正常对照组：高糖DMEM培养基；同型半胱氨酸（Hcy）损伤组（模型组）：16mmol/LHcy；盐酸甜菜碱高中低浓度组：16mmol/L Hcy+12.5mmol/L Be（t25mmol/L Bet，50mmol/LBet）。甜菜碱各组在Hcy损伤前Bet预处理12h，Hcy作用12h，采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化，MTT法检测细胞的增殖。药物对细胞凋亡的影响采用流式细胞仪检测凋亡率及试剂盒细胞上清液中LDH的释放，氧化应激指标采用比色法检测细胞上清液中SOD活性和MDA含量。Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果1Bet对HHcy大鼠脑组织的保护作用：利用高蛋氨酸饲料饮食建造大鼠高同型半胱氨酸血症动物模型。利用盐酸甜菜碱灌胃治疗，结果盐酸甜菜碱组血浆及脑组织SOD、MDA、NO、GSH的变化与模型组比较均变化显著(P <0.01)；HE染色结果表明甜菜碱组与模型组相比，模型组脑组织病理状态明显得到改善，明显保护受损的脑组织。2Bet对原代培养大鼠海马细胞的保护作用：建立体外培养海马细胞的方法并且鉴定成功，同型半胱氨酸损伤浓度为16mmol/L，盐酸甜菜碱的保护浓度分别为12.5、25、50mmol/L，流式细胞仪检测细胞凋亡率甜菜碱组细胞凋亡率明显低于模型组，具有统计学差异（P<0.01），MTT法结果与模型组比较，Bet各组细胞死亡率降低,Western-blot法结果与模型组比较，Bet组升高Bcl-2蛋白的表达、降低Bax蛋白的表达，具有显著性差异。结论1.建立大鼠高同型半胱氨酸血症动物模型。2.与对照组比较，高同型半胱氨酸血症模型大鼠的大脑皮质和海马组织有明显的病理变化，甜菜碱组的组织病理状态与模型组比较损伤减轻。表明甜菜碱对高同型半胱氨酸所致的脑组织损伤具有保护作用。3．高同型半胱氨酸血症模型大鼠与正常对照组比较，血浆与脑组织中SOD活性降低，同时GSH含量减少，MDA和NO水平明显增高，甜菜碱组与模型组比较血浆与脑组织匀浆中SOD活性和GSH含量明显提高，MDA和NO水平下降。表明甜菜碱保护同型半胱氨酸损伤的机制可能是通过提高脑组织抗氧化能力途径发挥作用。4建立体外提取、培养原代海马神经细胞的方法并且鉴定成功。低浓度Hcy可以促进细胞生长，高浓度Hcy可以抑制细胞生长，从而促进细胞凋亡；Bet能够降低Hcy诱导的海马神经元细胞的凋亡率，降低Hcy对神经元造成的损伤。5Bet可以提高同型半胱氨酸损伤的神经细胞SOD活力，降低同型半胱氨酸损伤的细胞MDA含量，通过降低氧化应激反应来保护高同型半胱氨酸对原代海马细胞的损伤。6Bet能够升高高同型半胱氨酸损伤的神经细胞中Bcl-2蛋白的表达、降低高同型半胱氨酸损伤的神经细胞中Bax蛋白表达，通过升高神经细胞中Bcl-2/Bax值拮抗Hcy诱导的的原代大鼠海马细胞的凋亡。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

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