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作者

王景苗

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

靳卫国

学位年度

2011

学位授予单位

泰山医学院

关键词

趋化因子受体4 卵巢癌 RNA干扰 侵袭

分类号

R737.31

摘要

目的依据RNA干扰能够特异性阻断目的基因表达的原理,本实验设计和构建趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)质粒,转染人卵巢癌细胞株SW626细胞,通过体外实验研究转染细胞CXCR4基因表达、迁移及侵袭能力的变化。方法构建、扩增并且鉴定含CXCR4siRNA的质粒载体,利用阳离子脂质体法转染人卵巢癌细胞株SW626细胞,实时RT-PCR ( real time reverse transcription-polymerase chain reaction,real timeRT-PCR)法及蛋白印记法(Western Blot)分别检测CXCR4的mRNA及蛋白的沉默效率的变化,MTT法检测细胞的生长活力,Transwell小室法观察细胞迁移及侵袭能力的变化。结果成功构建了含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,转染48小时后人卵巢癌细胞SW626的转染效率约为80%-90%。与对照组相比,干扰组的CXCR4mRNA及蛋白的表达均明显下降(P <0.01),而细胞的生长活力...更多

目的依据RNA干扰能够特异性阻断目的基因表达的原理,本实验设计和构建趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)质粒,转染人卵巢癌细胞株SW626细胞,通过体外实验研究转染细胞CXCR4基因表达、迁移及侵袭能力的变化。方法构建、扩增并且鉴定含CXCR4siRNA的质粒载体,利用阳离子脂质体法转染人卵巢癌细胞株SW626细胞,实时RT-PCR ( real time reverse transcription-polymerase chain reaction,real timeRT-PCR)法及蛋白印记法(Western Blot)分别检测CXCR4的mRNA及蛋白的沉默效率的变化,MTT法检测细胞的生长活力,Transwell小室法观察细胞迁移及侵袭能力的变化。结果成功构建了含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,转染48小时后人卵巢癌细胞SW626的转染效率约为80%-90%。与对照组相比,干扰组的CXCR4mRNA及蛋白的表达均明显下降(P <0.01),而细胞的生长活力仅部分受到抑制,并且此种抑制作用与时间的变化无关。细胞的转移及侵袭能力明显减弱(P <0.01)。结论以CXCR4为靶向的siRNA能够明显抑制卵巢癌细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。本实验为今后卵巢癌的基因干扰治疗提供了理论依据。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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