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作者

杨艳

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王家富，李伟

学位年度

2010

学位授予单位

泰山医学院

关键词

球松素 蜂胶 脂多糖 动脉粥样硬化 人脐静脉内皮细胞

分类号

R543

摘要

选择体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell, HUVEC)为研究对象,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导其活化,复制体外血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)损伤模型,观察球松素(Pinostrobin)对损伤血管内皮细胞的保护作用,从而探讨蜂胶黄酮类单体球松素抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用及其机制。方法1.消化灌注法培养HUVEC,鉴定后用于实验。2.脂多糖诱导建立人脐静脉血管内皮细胞损伤模型。3.倒置显微镜下观察HUVEC的形态变化。4.MTT比色法观察球松素对HUVEC活性的影响。5.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。6.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal-deoxynucleotidyl Transferase mediated Nick End Labeling...更多

选择体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell, HUVEC)为研究对象,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导其活化,复制体外血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)损伤模型,观察球松素(Pinostrobin)对损伤血管内皮细胞的保护作用,从而探讨蜂胶黄酮类单体球松素抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用及其机制。方法1.消化灌注法培养HUVEC,鉴定后用于实验。2.脂多糖诱导建立人脐静脉血管内皮细胞损伤模型。3.倒置显微镜下观察HUVEC的形态变化。4.MTT比色法观察球松素对HUVEC活性的影响。5.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。6.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal-deoxynucleotidyl Transferase mediated Nick End Labeling,TUNEL)检测HUVEC凋亡率。7.硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid,TBA)法和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)法测定检测细胞上清液中丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dimutase,SOD)含量。结果1. HUVEC的形态变化：倒置显微镜动态观察,对照组细胞生长状态良好,细胞呈梭形,单层铺路石状排列,折光性好。模型组细胞形态不规则,细胞收缩变圆,边界不清,部分细胞脱落；球松素组及阳性对照组可见细胞间隙变窄,形态趋于正常。2.MTT比色法观察HUVEC活性：较之对照组,模型组HUVEC活性明显降低,有统计学意义(P<0.01)。不同时间点球松素组均可抑制LPS诱导的HUVEC活性降低,较之模型组有统计学意义(P<0.05)。HUVEC活性随球松素浓度的增加而有增强的趋势。3.酶联免疫吸附法检测NO含量：模型组与对照组相比较,NO分泌均明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。球松素各浓度组与模型组相比,NO分泌增强,具有统计学意义(P0.05)；其它各时间点模型组与对照组相比较,细胞凋亡率明显增高,具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度球松素组HUVEC凋亡率明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01),并呈现出一定的浓度依赖趋势。5.硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定检测细胞上清液中MDA及SOD含量：较之对照组,模型组SOD活性明显降低(P<0.05),具有统计学意义。不同浓度球松素组与模型组比较SOD活性明显升高(P<0.01),有统计学意义；结果呈现出一定的浓度依赖趋势；细胞上清液中的MDA含量无统计学意义。6.球松素与辛伐他汀联合用药：球松素或辛伐他汀单一药物预处理组与未用药组比较,HUVEC活性增强、NO分泌增多、细胞凋亡率降低,具有统计学意义(P<0.01)；球松素和辛伐他汀联合预处理组与单一药物预处理组比较,细胞活性增强、NO分泌增多、细胞凋亡率降低,有统计学意义(P<0.01)。各项指标A2水平和B2水平的均数之差均小于A1水平和B1水平的均数之差,显示球松素和辛伐他汀联合应用对于保护血管内皮细胞有协同作用。结论1.球松素可改善内皮细胞形态、增强HUVEC活性及NO分泌,降低HUVEC凋亡率,证明球松素具有保护血管内皮细胞功能的作用。2.球松素可增强细胞上清液SOD活力,证明球松素具有抗氧化,保护血管内皮细胞功能的作用。3.球松素与辛伐他汀联合应用,可协同保护LPS诱导的血管内皮细胞损伤。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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