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作者

王福庆

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王庆宝

学位年度

2008

学位授予单位

泰山医学院

关键词

真核表达载体 恶性肿瘤 分子生物学 肿瘤治疗 肿瘤细胞

分类号

R730.5

摘要

研究背景： 近年来，恶性肿瘤对人类的威胁日趋严重。传统的肿瘤治疗方法存在其局限性。人们正积极研究新的肿瘤治疗方法，以期获得更好的疗效。随着分子生物学研究的飞速发展，细胞生长、分化、凋亡的机制逐渐被认识，一种新的治疗方法-基因治疗正在成为研究热点。其中，凋亡素基因能够特异地诱导肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗上的前景尤为突出。凋亡素能选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡，而并不杀伤人和鼠的正常二倍体细胞。因此，被认为是第一个真正意义上的选择性诱导肿瘤细胞凋亡、而不损伤正常细胞的凋亡基因。经过研究凋亡素能够诱导人成骨肉瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、鳞状细胞癌细胞、宫颈癌细胞等多种肿瘤细胞凋亡。凋亡素基因表达载体的构建是凋亡素分子生物学特点研究及其在肿瘤基因治疗方面应用的基础，如何成功构建具有较高转染率和更利于结果观察的凋亡素基因表达载体尤为重要。 研究目的： 构建含报告基因的凋亡素基因真核表达载体。 研究方法： 对pMD18T-VP3质粒进行EcorI和BamHI双酶切，回收366bp(含凋亡素基因完整序列)片段。对增强型绿荧光蛋白pEGFP-C2质粒酶切，回收载体大片段。将凋亡素基因...更多

研究背景： 近年来，恶性肿瘤对人类的威胁日趋严重。传统的肿瘤治疗方法存在其局限性。人们正积极研究新的肿瘤治疗方法，以期获得更好的疗效。随着分子生物学研究的飞速发展，细胞生长、分化、凋亡的机制逐渐被认识，一种新的治疗方法-基因治疗正在成为研究热点。其中，凋亡素基因能够特异地诱导肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗上的前景尤为突出。凋亡素能选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡，而并不杀伤人和鼠的正常二倍体细胞。因此，被认为是第一个真正意义上的选择性诱导肿瘤细胞凋亡、而不损伤正常细胞的凋亡基因。经过研究凋亡素能够诱导人成骨肉瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、鳞状细胞癌细胞、宫颈癌细胞等多种肿瘤细胞凋亡。凋亡素基因表达载体的构建是凋亡素分子生物学特点研究及其在肿瘤基因治疗方面应用的基础，如何成功构建具有较高转染率和更利于结果观察的凋亡素基因表达载体尤为重要。 研究目的： 构建含报告基因的凋亡素基因真核表达载体。 研究方法： 对pMD18T-VP3质粒进行EcorI和BamHI双酶切，回收366bp(含凋亡素基因完整序列)片段。对增强型绿荧光蛋白pEGFP-C2质粒酶切，回收载体大片段。将凋亡素基因通过连接反应，连接到增强型绿荧光蛋白(EGFP)基因C末端的终止密码前，并使两者读框不移位，构建成pEGFP-VP3质粒。并对其进行酶切分析和测序鉴定载体结构。 研究结果： 通过对构建对的pEGFP-VP3质粒酶切、电泳，出现了366bp的电泳条带，与凋亡素基因片段一致。凋亡素基因真核表达载体测序鉴定结果表明，本研究合成的凋亡素基因与Genbank中报告的凋亡素基因序列一致，同源性为100％。 研究结论： 将凋亡素基因连接于增强型绿荧光蛋白的C末端，成功构建了凋亡素-增强型绿荧光蛋白表达载体pEGFP-VP3。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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