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作者

焦凤萍 郑绮涵 王玉 于广福 于爱莲

作者单位

泰山医学院病原学教研室

会议名称

中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

会议录

中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会论文集

会议地点

重庆

召开年

2012

关键词

多表位基因 IL-18 单纯疱疹病毒Ⅱ型 HBsAg DNA疫苗

分类号

R3;R73

摘要

目的：研究多表位串联重组核酸疫苗中IL18与HBsAg (S)抗原、P6 (NP6)抗原在质粒中所处位置的差异对抗原表达是否有影响.P6序列是我们前期筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列(Accession Number： E00394).方法：分别将IL18连接在融合蛋白P6-S (NP6-S)的氨基端和羧基端,即构建四种质粒： pc-IL18-P6-S、pc-IL18-NP6-S、pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18.采用DNAstar软件分析四种质粒表达的融合蛋白的抗原性.将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blotting检测S、P6 (NP6)抗原的表达情况,以确定最佳的连接方式.结果：应用DNAstar软件分析可知IL18在融合蛋白的氨基端的抗原性高于在羧基端.间接免疫荧光检测结果发现IL18位于融合蛋白羧基端的质粒表达的抗原性优于氨基端,即：质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18的S、P6 (NP6)抗原的表达情况均优于质粒pc-IL...更多

目的：研究多表位串联重组核酸疫苗中IL18与HBsAg (S)抗原、P6 (NP6)抗原在质粒中所处位置的差异对抗原表达是否有影响.P6序列是我们前期筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列(Accession Number： E00394).方法：分别将IL18连接在融合蛋白P6-S (NP6-S)的氨基端和羧基端,即构建四种质粒： pc-IL18-P6-S、pc-IL18-NP6-S、pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18.采用DNAstar软件分析四种质粒表达的融合蛋白的抗原性.将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blotting检测S、P6 (NP6)抗原的表达情况,以确定最佳的连接方式.结果：应用DNAstar软件分析可知IL18在融合蛋白的氨基端的抗原性高于在羧基端.间接免疫荧光检测结果发现IL18位于融合蛋白羧基端的质粒表达的抗原性优于氨基端,即：质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18的S、P6 (NP6)抗原的表达情况均优于质粒pc-IL18-P6-S和pc-IL18-NP6-S,故选用质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18作为优势质粒.结论：成功构建了四种质粒,并通过实验方法确定了优势质粒,此项技术将为新一代多基因核酸疫苗的研制提供实验依据,从而为构建更加有效的多价DNA疫苗奠定了良好的基础.收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

会议论文

浏览量

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