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作者

焦凤萍 郑绮菡 王玉 于爱莲 于广福

作者单位

泰山医学院病原学教研室

刊名

免疫学杂志

年份

2012

卷号

第4期

页码

337-340

ISSN

1000-8861

关键词

多表位基因 IL-18 单纯疱疹病毒II型 HBsAg DNA疫苗

分类号

R392

摘要

目的 研究多表位串联重组核酸疫苗中IL18与HBsAg(S)抗原、P6(NP6)抗原在质粒中所处位置的差异对抗原表达是否有影响.方法 分别将IL18连接在融合蛋白P6-S(NP6-S)的氨基端和羧基端,即构建4种质粒:pc-ILI8-P6-S、pc-IL18-NP6-S、pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL 18.采用DNAstar软件分析4种质粒表达的融合蛋白的抗原性.将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blotting检测S、P6(NP6)抗原的表达情况,以确定最佳的连接方式.结果 应用DNAstar软件分析可知IL18在融合蛋白的氨基端的抗原性高于在羧基端.间接免疫荧光检测结果发现IL18位于融合蛋白羧基端的质粒表达的抗原性优于氨基端,即:质粒pc-S-P6-ILI8和pc-S-NP6-ILI8的S、P6(NP6)抗原的表达情况均优于质粒pc-IL1 8-P6-S和pc-IL18-NP6-S,故选用质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18作为优势质粒.结论 成功构建了4种质粒,并确定了优势质粒,此项技术将为新一代...更多

目的 研究多表位串联重组核酸疫苗中IL18与HBsAg(S)抗原、P6(NP6)抗原在质粒中所处位置的差异对抗原表达是否有影响.方法 分别将IL18连接在融合蛋白P6-S(NP6-S)的氨基端和羧基端,即构建4种质粒:pc-ILI8-P6-S、pc-IL18-NP6-S、pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL 18.采用DNAstar软件分析4种质粒表达的融合蛋白的抗原性.将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blotting检测S、P6(NP6)抗原的表达情况,以确定最佳的连接方式.结果 应用DNAstar软件分析可知IL18在融合蛋白的氨基端的抗原性高于在羧基端.间接免疫荧光检测结果发现IL18位于融合蛋白羧基端的质粒表达的抗原性优于氨基端,即:质粒pc-S-P6-ILI8和pc-S-NP6-ILI8的S、P6(NP6)抗原的表达情况均优于质粒pc-IL1 8-P6-S和pc-IL18-NP6-S,故选用质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18作为优势质粒.结论 成功构建了4种质粒,并确定了优势质粒,此项技术将为新一代多基因核酸疫苗的研制提供实验依据,从而为构建更加有效的多价DNA疫苗奠定了良好的基础.收起

基金

山东省自然科学基金

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

62