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作者

顾洪雁 王磊 李洪涛 陶如

作者单位

泰山医学院生化教研室 泰山医学院生化教研室 泰安

刊名

中国生物制品学杂志

年份

2008

卷号

第21卷

期号

第1期

页码

59-59

ISSN

1004-5503

关键词

铜锌超氧化物歧化酶 猪血 提取 Cu-Zn-SOD 凝胶层析

分类号

Q814.1

摘要

超氧化物歧化酶(SOD)在我国目前虽有生产,但由于技术原因,产量很低,在临床上很少应用。为此,本文从猪血中提取出Cu,Zn-SOD,采用凝胶层析的方法,一步即可生产出纯酶。取新鲜猪血5000ml,加柠檬酸钠20g后,离心得红细胞。用0.9%的生理盐水洗涤3次后,加等体积蒸馏水,冰浴中搅拌溶血30min,置0~4℃冰箱中过夜。次日溶血后,缓缓加入预冷的0.25倍体积的95%乙醇和0.15倍体积氯仿,搅拌15min,静置30min,离心取上清。如果上清呈淡红色,则再次进行离心,直到呈淡黄色。所得淡黄色液体即为粗酶提取液。采用Sephadex G100与Sephadex G50串联柱层析纯化。结果粗酶液经第1次Sephadex G100-G50柱层析后,出现3个峰,第1、2峰为活性峰,第3峰为杂蛋白峰。经电泳分析,第1峰需进一步纯化。第1峰经第2次Sephadex G100-G50柱层析后,也出现3个峰,其中第2峰为活性峰。经电泳分析,第2峰与第1次纯化的第2峰的电泳条带数一致,表明均达到电泳纯。将2次纯化后的酶液合并后,经SDS-PAGE分析,所纯化的酶与酶标准品纯度一致,均出现2条带,1...更多

超氧化物歧化酶(SOD)在我国目前虽有生产,但由于技术原因,产量很低,在临床上很少应用。为此,本文从猪血中提取出Cu,Zn-SOD,采用凝胶层析的方法,一步即可生产出纯酶。取新鲜猪血5000ml,加柠檬酸钠20g后,离心得红细胞。用0.9%的生理盐水洗涤3次后,加等体积蒸馏水,冰浴中搅拌溶血30min,置0~4℃冰箱中过夜。次日溶血后,缓缓加入预冷的0.25倍体积的95%乙醇和0.15倍体积氯仿,搅拌15min,静置30min,离心取上清。如果上清呈淡红色,则再次进行离心,直到呈淡黄色。所得淡黄色液体即为粗酶提取液。采用Sephadex G100与Sephadex G50串联柱层析纯化。结果粗酶液经第1次Sephadex G100-G50柱层析后,出现3个峰,第1、2峰为活性峰,第3峰为杂蛋白峰。经电泳分析,第1峰需进一步纯化。第1峰经第2次Sephadex G100-G50柱层析后,也出现3个峰,其中第2峰为活性峰。经电泳分析,第2峰与第1次纯化的第2峰的电泳条带数一致,表明均达到电泳纯。将2次纯化后的酶液合并后,经SDS-PAGE分析,所纯化的酶与酶标准品纯度一致,均出现2条带,1条为分子带,1条为亚基带...收起

学科

【教育部学科】工学

文献类型

期刊

浏览量

53