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作者

于琦 孟秀香 袁宏 王楠 姜艳梅 马末娇

作者单位

中国人民解放军第210医院 泰山医学院医学检验系 大连医科大学检验医学院 大连医科大学附属第一医院检验科

刊名

大连医科大学学报

年份

2010

卷号

第1期

页码

90-93

ISSN

1671-7295

关键词

Bmi-1基因 急性白血病 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR

分类号

R733.71

摘要

[目的]建立荧光实时定量RT-PCR(FQRT-PCR)检测Bmi-1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将Bmi-1及GAPDHRT-PCR扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测Bmi-1 mRNA的FQ RT-PCR方法,并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1 mRNA的表达水平。[结果]该方法的线性范围为1.0×103~1.0×108copies/μL,相关系数为-1.00,熔解曲线分析扩增产物显示单一的峰,熔解温度(Tm)为80.4℃。急性白血病患者的相对表达量为0.56±0.12,健康对照组中Bmi-1 mRNA的相对表达量为0.19±0.08,两者的表达差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]实时荧光定量RT-PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究Bmi-1基...更多

[目的]建立荧光实时定量RT-PCR(FQRT-PCR)检测Bmi-1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将Bmi-1及GAPDHRT-PCR扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测Bmi-1 mRNA的FQ RT-PCR方法,并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1 mRNA的表达水平。[结果]该方法的线性范围为1.0×103~1.0×108copies/μL,相关系数为-1.00,熔解曲线分析扩增产物显示单一的峰,熔解温度(Tm)为80.4℃。急性白血病患者的相对表达量为0.56±0.12,健康对照组中Bmi-1 mRNA的相对表达量为0.19±0.08,两者的表达差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]实时荧光定量RT-PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究Bmi-1基因的方法。Bmi-1基因参与急性白血病的发生,可能是一种新的肿瘤标志物。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

30