pDsRed-hAPJ质粒载体构建及在人HEK293细胞中的表达

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摘要: 背景:Apelin/APJ系统具有广泛的生理作用,但其在细胞内信号转导,特别是apelin受体的脱敏,内化、复敏降解等方面仍无一致性见解。目的:构建人apelin受体APJ与红色荧光蛋白pDsRED-express-C1融合的真核表达载体并检测其在人胚胎肾293细胞中的表达。方法:以质粒pcDNA3.1-hAPJ为模板,扩增人APJ,用EcoRI和BamHI分别酶切扩增的产物和pDsRED-express-C1载体,常规连接、转化感受态大肠杆菌TOP10。提取质粒,进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染,PI染色,激光共聚焦显微镜观察。结果与结论:PCR扩增出约1.2kb的片段,与预期的人APJ大小序列相符,酶切结果显示重组质粒被切成2条片段,其中一条为pDsRED载体大小,另一条为目的片段大小。共聚焦显微观察显示APJ主要表达在细胞膜上。说明实验成功构建了pDsRed-hAPJ真核重组质粒,此表达载体为研究人APJ的亚细胞区域的位移、内吞定位提供了重要的工具。

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