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作者

杜辉 白波 陈京 刘海青 李雅林

作者单位

济宁医学院神经生物学研究所 泰山医学院神经生物学研究所

刊名

中国组织工程研究与临床康复

年份

2010

卷号

第14卷

期号

第50期

页码

9489-9492

ISSN

2095-4344

关键词

载体构建 G蛋白偶联受体 apelin受体 红色荧光蛋白 基因表达

摘要

背景: Apelin/APJ系统具有广泛的生理作用,但其在细胞内信号转导,特别是apelin受体的脱敏,内化,复敏降解等方面仍无一致性见解.目的:构建人 apelin受体APJ与红色荧光蛋白pDsRED-express-C1融合的真核表达载体并检测其在人胚胎肾293细胞中的表达.方法:以质粒pcD NA3.1-hAPJ为模板,扩增人APJ,用EcoRI和BamHI分别酶切扩增的产物和pDsRED-express-C1载体,常规连接,转化感受 态大肠杆菌TOP10.提取质粒,进行酶切鉴定,最后进行测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染,PI染色,激光共聚焦显微镜观察.结果与结论: PCR扩增出约1.2kb的片段,与预期的人APJ大小序列相符,酶切结果显示重组质粒被切成2条片段,其中一条为pDsRED载体大小,另一条为目的片 段大小.共聚焦显微观察显示APJ主要表达在细胞膜上.说明实验成功构建了pDsRed-hAPJ真核重组质粒,此表达载体为研究人APJ的亚细胞区域的 位移,内吞定位提供了重要的工具

基金

国家自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

33