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作者

李欣绪 周忠启 王志奎 张磊 孙丽娜 蔄瑜林

作者单位

临沂市人民医院 山东第一医科大学研究生院

刊名

安徽医药

年份

2023

卷号

第2期

ISSN

1009-6469

关键词

腹膜纤维化 尿毒症 超滤 腹膜透析 microRNA-326-3p 双荧光素酶报告实验

摘要

目的 研究长链非编码RNA6030408B16RIK结合微小RNA致大鼠尿毒症模型腹膜纤维化的机制，为预防超滤衰竭提供新的依据。方法 将36只造模成功的尿毒症大鼠分为六组，每组6只大鼠，分别为：尿毒症组，空白组，NC组，inhibitor NC组，miR-326-3p mimic组，miR-326-3p inhibitor组。构建LncRNA6030408B16RIK原始序列载体及LncRNA6030408B16RIK突变体载体，将miR-326-3p模拟物及模拟物阴性对照分别与荧光素酶报告载体共同转入HEK-293T细胞中；以双荧光素酶报告实验、RNA pull down实验验证LncRNA6030408B16RIK与miR-326-3p的靶向关系，用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法分析包括α-平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞特异性蛋白-1、波形蛋白、E-钙黏蛋白等在内的多种腹膜纤维化相关因子的表达情况。结果 双荧光素酶实验结果：pWt-LncRNA6030408B16RIK的 荧 光 素 酶 活 性［比］明 显 降 低，而 pMut-LncRNA6030408B16RIK的...更多

目的 研究长链非编码RNA6030408B16RIK结合微小RNA致大鼠尿毒症模型腹膜纤维化的机制，为预防超滤衰竭提供新的依据。方法 将36只造模成功的尿毒症大鼠分为六组，每组6只大鼠，分别为：尿毒症组，空白组，NC组，inhibitor NC组，miR-326-3p mimic组，miR-326-3p inhibitor组。构建LncRNA6030408B16RIK原始序列载体及LncRNA6030408B16RIK突变体载体，将miR-326-3p模拟物及模拟物阴性对照分别与荧光素酶报告载体共同转入HEK-293T细胞中；以双荧光素酶报告实验、RNA pull down实验验证LncRNA6030408B16RIK与miR-326-3p的靶向关系，用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法分析包括α-平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞特异性蛋白-1、波形蛋白、E-钙黏蛋白等在内的多种腹膜纤维化相关因子的表达情况。结果 双荧光素酶实验结果：pWt-LncRNA6030408B16RIK的 荧 光 素 酶 活 性［比］明 显 降 低，而 pMut-LncRNA6030408B16RIK的荧光素酶活性［比］没有明显变化。与尿毒症组相比，miR-326-3p mimic组中α-SMA、FSP1、波形蛋白表达量［、、比、、］明显下降，E-钙黏蛋白［比］明显上升，而与空白组相比，miR-326-3p inhibitor组中α-SMA、FSP1、波形蛋白表达［、、比、、］明显上升，E-钙黏蛋白表达［比］明显下降。结论 LncRNA6030408B16RIK可直接结合miR-326-3p，而过表达miR-326-3p可抑制尿毒症大鼠腹膜透析超滤衰竭的发生。收起

基金

山东省自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

29