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作者

王秋媛 张瑞婷 尹文娇 曹经瑗 李晓梅 毕胜利

作者单位

中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室 山东第一医科大学（山东省医学科学院）公共卫生与健康管理学院

刊名

中华实验和临床病毒学杂志

年份

2023

卷号

第37卷

期号

第6期

页码

650-656

ISSN

1003-9279

关键词

牡蛎 戊型肝炎病毒 前处理方法 核酸提取 Real time RT-PCR

摘要

目的对牡蛎中戊型肝炎病毒检测方法进行比较，为牡蛎中HEV的检测提供技术参考。方法参考欧盟ISO/TS 15216-2∶2019，用蛋白酶K消化法对人工污染HEV粪便悬液的牡蛎消化腺标本进行前处理后，分别用四种核酸提取方法进行HEV RNA提取，通过Real time RT-PCR检测，比较HEV回收率；分别用蛋白酶K消化法、蛋白酶K消化＋PEG沉淀法和蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法对人工污染的牡蛎消化腺标本进行前处理，用最优核酸提取方法进行HEV RNA提取，通过Real time RT-PCR检测，比较三种前处理方法的HEV回收率和抑制率。将最优HEV检测方法应用于市售牡蛎标本检测。结果四种核酸提取方法的HEV回收率分别为1.37%，2.50%，4.24%和7.56%，差异有统计学意义；三种前处理方法的HEV回收率分别为6.02%，13.65%和21.17%，差异有统计学意义，蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法回收率最高；三种方法的抑制率分别为13.38%，20.98%和8.66%，差异具有统计学意义，蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法抑制率最低。在120份市售牡蛎标本中检...更多

目的对牡蛎中戊型肝炎病毒检测方法进行比较，为牡蛎中HEV的检测提供技术参考。方法参考欧盟ISO/TS 15216-2∶2019，用蛋白酶K消化法对人工污染HEV粪便悬液的牡蛎消化腺标本进行前处理后，分别用四种核酸提取方法进行HEV RNA提取，通过Real time RT-PCR检测，比较HEV回收率；分别用蛋白酶K消化法、蛋白酶K消化＋PEG沉淀法和蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法对人工污染的牡蛎消化腺标本进行前处理，用最优核酸提取方法进行HEV RNA提取，通过Real time RT-PCR检测，比较三种前处理方法的HEV回收率和抑制率。将最优HEV检测方法应用于市售牡蛎标本检测。结果四种核酸提取方法的HEV回收率分别为1.37%，2.50%，4.24%和7.56%，差异有统计学意义；三种前处理方法的HEV回收率分别为6.02%，13.65%和21.17%，差异有统计学意义，蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法回收率最高；三种方法的抑制率分别为13.38%，20.98%和8.66%，差异具有统计学意义，蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法抑制率最低。在120份市售牡蛎标本中检出一份HEV RNA阳性标本。结论在对牡蛎标本进行HEV检测时，用蛋白酶K消化＋PEG沉淀＋氯仿抽提法进行前处理，能够提高牡蛎中HEV的回收率，更适用于牡蛎标本的前处理；不同厂家的病毒核酸提取方法的HEV回收率不同，开展检测前应比对筛选，择优使用。收起

基金

国家科技重大专项

文献类型

期刊

浏览量

7