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作者

张颖

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王学春，柳雅玲

学位年度

2013

学位授予单位

泰山医学院

关键词

乳腺癌干细胞 Wnt/β-catenin信号通路 Noctch1 MMP-9

分类号

R737.9

摘要

目的目前研究证实，乳腺癌干细胞是导致乳腺癌转移的根源。Notch1分子可能通过提高乳腺癌干细胞迁徙活性促进乳腺癌的转移。本课题的研究目的如下：1、通过使用悬浮微球培养技术培养乳腺癌MCF-7细胞株，检测细胞CD44、 CD24表达情况，验证乳腺癌干细胞有效富集及判断富集效率。2、通过使用悬浮微球培养技术获得乳腺癌干细胞，贴壁培养技术获得乳腺癌未分类细胞，对比检测Notch1、Wnt1、β-catenin、MMP-9表达差异，分析乳腺癌干细胞迁徙活性变化及迁徙活性与Notch1表达水平的相关性。3、利用siRNA靶向沉默Notch1基因从而阻断Notch1信号通路来观察乳腺癌干细胞wnt1、基质金属蛋白酶﹣9（MMP-9）以及β-catenin的表达情况，分析Notch1分子对乳腺癌干细胞Wnt1、β-catenin、MMP-9表达的影响探讨沉默Notch1对Wnt/β-catenin信号通路及MMP-9在乳腺癌中的发生及发展过程中所起的作用，从而为研究乳腺癌的发病机制提供依据。方法1、以人乳腺癌MCF-7细胞株为研究对象，分别使用贴壁细胞培养和悬浮微球培养方法培养细胞，使用流式细胞仪技...更多

目的目前研究证实，乳腺癌干细胞是导致乳腺癌转移的根源。Notch1分子可能通过提高乳腺癌干细胞迁徙活性促进乳腺癌的转移。本课题的研究目的如下：1、通过使用悬浮微球培养技术培养乳腺癌MCF-7细胞株，检测细胞CD44、 CD24表达情况，验证乳腺癌干细胞有效富集及判断富集效率。2、通过使用悬浮微球培养技术获得乳腺癌干细胞，贴壁培养技术获得乳腺癌未分类细胞，对比检测Notch1、Wnt1、β-catenin、MMP-9表达差异，分析乳腺癌干细胞迁徙活性变化及迁徙活性与Notch1表达水平的相关性。3、利用siRNA靶向沉默Notch1基因从而阻断Notch1信号通路来观察乳腺癌干细胞wnt1、基质金属蛋白酶﹣9（MMP-9）以及β-catenin的表达情况，分析Notch1分子对乳腺癌干细胞Wnt1、β-catenin、MMP-9表达的影响探讨沉默Notch1对Wnt/β-catenin信号通路及MMP-9在乳腺癌中的发生及发展过程中所起的作用，从而为研究乳腺癌的发病机制提供依据。方法1、以人乳腺癌MCF-7细胞株为研究对象，分别使用贴壁细胞培养和悬浮微球培养方法培养细胞，使用流式细胞仪技术检测其CD44+/CD24-/low细胞比例，验证微球悬浮培养能够高效富集乳腺癌干细胞。2、分离提取乳腺癌MCF-7细胞株中的乳腺癌干细胞分为3组，分别为空白组、无意义干扰组（含有无意义干扰分子以及5uL脂质体li2000的混合物转染）以及Notch1分子干扰组（含有靶向Notch1分子干扰siRNA以及5uL脂质体li2000的混合物转染），并采用western-blot以及RT﹣PCR方法测定乳腺癌的Notch1的表达，24小时后采用上述方法分别测定乳腺癌空白组、无意义干扰组以及Notch1分子干扰组中Wnt1、β-catenin、MMP-9的表达情况。结果1、使用体外微球悬浮培养技术有效富集乳腺癌干细胞。CD44+/CD24-/low细胞数占总数的87.0%左右。贴壁细胞置悬浮培养基中，一部分细胞发生凋亡，另一部分细胞逐渐增殖形成微球。微球为大小不等、形态不规则的球囊，球囊细胞消化制成单细胞悬液可增殖重新形成球囊。若悬浮微球细胞置贴壁细胞培养基中，可长出伪足，重新贴壁。2、悬浮微球细胞与普通贴壁细胞相比,Notch1、MMP-9mRNA转录水平明显提高（P﹤0.05）,Wnt1mRNA转录降低（P﹤0.05），β-catenin无变化。3、沉默悬浮细胞Notch1基因后，其Wnt1表达明显提高（P﹤0.05），β-catenin、MMP-9无变化。结论1、悬浮微球技术在体外环境中可以有效富集乳腺癌干细胞，富集的乳腺癌干细胞浓度达87.0%左右，可以为体外沉默乳腺癌干细胞Notch1构建实验模型。2、悬浮微球所富集的乳腺癌干细胞较贴壁培养的未分类乳腺癌细胞Notch1、 MMP-9转录提高， Wnt1转录降低， β-catenin转录无变化。3、沉默悬浮细胞所富集的乳腺癌干细胞Notch1后，细胞Wnt1提示转录明显提高，β-catenin、MMP-9无变化。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

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