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作者

姚树桐 杨娜娜 宋国华 桑慧 田华 张颖 秦树存

作者单位

泰山医学院动脉粥样硬化研究所 泰山医学院基础医学院

刊名

中国动脉硬化杂志

年份

2011

卷号

第19卷

期号

第3期

页码

242

ISSN

1007-3949

关键词

内质网应激 巨噬细胞 轻度氧化低密度脂蛋白 动脉粥样硬化

分类号

R341

摘要

目的研究巨噬细胞泡沫化过程中轻度氧化低密度脂蛋白(mm-LDL)对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路。方法体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,分别给予mm-LDL(25、50和100 mg/L)和衣霉素(TM)处理6、12和24 h。采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,酶比色法测定细胞内总胆固醇含量,免疫荧光细胞化学法观测转录激活因子6(ATF6)核转位情况,免疫印迹法检测内质网应激转导子1(IRE1)磷酸化水平和X盒结合蛋白1(XBP1)及内质网分子伴侣糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达,RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果 mm-LDL呈浓度依赖性增加细胞内总胆固醇含量,胞浆内可见大量油红O染色阳性脂质颗粒,以12 h时最为显著;与内质网应激诱导剂TM相似,mm-LDL显著诱导ATF-6由胞浆向细胞核内转移,并上调磷酸化IRE1及其下游信号分子XBP1和GRP78蛋白的表达,且表达强度随着mm-LDL诱导浓度的增加而增强;50 mg/L mm-LDL处理组GRP78 mRNA的表达于作用后6 h即发生显著上调,为对照组的3.7倍,而蛋白表达水平也明显增加,...更多

目的研究巨噬细胞泡沫化过程中轻度氧化低密度脂蛋白(mm-LDL)对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路。方法体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,分别给予mm-LDL(25、50和100 mg/L)和衣霉素(TM)处理6、12和24 h。采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,酶比色法测定细胞内总胆固醇含量,免疫荧光细胞化学法观测转录激活因子6(ATF6)核转位情况,免疫印迹法检测内质网应激转导子1(IRE1)磷酸化水平和X盒结合蛋白1(XBP1)及内质网分子伴侣糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达,RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果 mm-LDL呈浓度依赖性增加细胞内总胆固醇含量,胞浆内可见大量油红O染色阳性脂质颗粒,以12 h时最为显著;与内质网应激诱导剂TM相似,mm-LDL显著诱导ATF-6由胞浆向细胞核内转移,并上调磷酸化IRE1及其下游信号分子XBP1和GRP78蛋白的表达,且表达强度随着mm-LDL诱导浓度的增加而增强;50 mg/L mm-LDL处理组GRP78 mRNA的表达于作用后6 h即发生显著上调,为对照组的3.7倍,而蛋白表达水平也明显增加,并于12 h达到高峰,此后仍维持较高水平。结论 mm-LDL可呈剂量依赖性诱导RAW264.7巨噬细胞产生内质网应激,激活ATF6和IRE1所介导的未折叠蛋白反应信号通路。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

33