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作者

张燕堂

作者单位

泰山医学院

学位名称

硕士

导师姓名

王家富

学位年度

2011

学位授予单位

泰山医学院

关键词

二苯乙烯苷 内皮细胞 溶血性磷脂酰胆碱 非对称性二甲基精氨酸 细胞凋亡

分类号

R363

摘要

目的观察在溶血性磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC)诱导下,二苯乙烯苷(2,3,5,4′-Tetrahydroxysilbene-2 -O-β-D-glucopyranoside TSG)对血管内皮细胞(Vein Endothelial Cell,VEC)损伤的保护作用,并对其作用机制进行的研究。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)株,经传代,于第3-4代用于实验。随机将细胞分为:空白对照;模型组;实验组。首先将LPC以10ug/ml作用于HUVEC,并与细胞一起孵育24小时诱导内皮细胞损伤,建立细胞损伤的模型;将TSG以10.0; 1.0; 0.1μmol/l预先作用于HUVEC 1小时后,再给予10μg/ml的LPC作用于HUVEC共同孵育24小时,建立实验组;同时,设立不加药物的空白对照组。然后,收集细胞上清液测定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)含量;收集细胞,测定其中的活性氧(ROS)水平、细胞的凋亡率和存活率。用硝酸还原酶法检...更多

目的观察在溶血性磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC)诱导下,二苯乙烯苷(2,3,5,4′-Tetrahydroxysilbene-2 -O-β-D-glucopyranoside TSG)对血管内皮细胞(Vein Endothelial Cell,VEC)损伤的保护作用,并对其作用机制进行的研究。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)株,经传代,于第3-4代用于实验。随机将细胞分为:空白对照;模型组;实验组。首先将LPC以10ug/ml作用于HUVEC,并与细胞一起孵育24小时诱导内皮细胞损伤,建立细胞损伤的模型;将TSG以10.0; 1.0; 0.1μmol/l预先作用于HUVEC 1小时后,再给予10μg/ml的LPC作用于HUVEC共同孵育24小时,建立实验组;同时,设立不加药物的空白对照组。然后,收集细胞上清液测定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)含量;收集细胞,测定其中的活性氧(ROS)水平、细胞的凋亡率和存活率。用硝酸还原酶法检测细胞上清液中的NO的浓度;用硫代巴比妥法检测细胞上清液中MDA的含量;生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中ADMA含量;荧光显微镜观察细胞内ROS水平、Annexin V-FITC/PI荧光双染色法流式细胞仪测定其细胞的凋亡率、MTT法检测细胞的存活率。结果1.与空白对照组比较结果显示,用LPC(10μg/ml)作用于HUVEC24小时后,观测到细胞培养上清液中MDA含量(P<0.05),ADMA含量(P<0.05)及细胞内ROS水平(P<0.05)都显著性增加,而细胞培养上清液中NO含量明显降低(P<0.05),细胞的凋亡有所增加(P<0.05),致使细胞的存活率降低(P<0.05)。2.与LPC损伤组比较中,可以看到,以10.0, 1.0, 0.1 umol/1浓度的TSG作用HUVEC 1小时后,再予以终浓度为10μg/ml的LPC作用HUVEC一起孵育24小时后,显示:其均能使细胞培养上清液中MDA含量(P<0.05)、ADMA含量(P<0.05)及细胞内ROS水平(P<0.05)显著性降低,而细胞上清液中的NO含量显著性升高(P<0.05),出现了细胞的凋亡率降低(P<0.05)和细胞的存活率(P<0.05)显著性升高的现象。结论1.二苯乙烯苷能够抑制血管内皮细胞的凋亡,而对LPC诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。2.二苯乙烯苷对LPC诱导血管内皮细胞损伤的保护作用与其抗氧化、升高NO浓度、降低ADMA水平有关。收起

学科

【教育部学科】医学

文献类型

学位论文

浏览量

35