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作者

付琳琳 王玉 赵雪梅

作者单位

山东第一医科大学(山东省医学科学院)药学院 山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院

刊名

山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报

年份

2023

卷号

第7期

ISSN

2097-0005

关键词

HepG2肝癌细胞 OBSCN 过表达 基因敲除 重组质粒

摘要

目的 构建细胞骨架蛋白OBSCN基因过表达和敲除的稳转细胞系，初步探究OBSCN突变对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 qPCR技术确定HepG2肝癌细胞有无OBSCN本底表达，慢病毒感染HepG2细胞构建过表达细胞系；Crispr cas9 技术构建敲除细胞系；并利用Western blot 技术检测敲除及过表达细胞Obscurin 蛋白表达量，CCK-8法和Transwell小室法探究OBSCN突变细胞株的增殖和迁移能力。结果 qPCR验证HepG2细胞无OBSCN本底表达，慢病毒感染得到HepG2 H21157过表达稳转细胞系和HepG2 GL119对照空载体稳转细胞系；菌落PCR、质粒PCR 以及基因测序结果验证敲除重组质粒reOBSCN 构建成功，转染得到OBSCN 敲除的HepG2 OBSCN KO 稳转细胞系和对照空载体HepG2 ecas稳转细胞系；Western blot技术验证OBSCN敲除及过表达细胞系构建成功；CCK-8法结果显示OBSCN过表达加快了HepG2细胞增殖，差异有统计学意义，OBSCN基因的敲除可以减慢HepG2细胞增殖，差异有统计学意义；...更多

目的 构建细胞骨架蛋白OBSCN基因过表达和敲除的稳转细胞系，初步探究OBSCN突变对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 qPCR技术确定HepG2肝癌细胞有无OBSCN本底表达，慢病毒感染HepG2细胞构建过表达细胞系；Crispr cas9 技术构建敲除细胞系；并利用Western blot 技术检测敲除及过表达细胞Obscurin 蛋白表达量，CCK-8法和Transwell小室法探究OBSCN突变细胞株的增殖和迁移能力。结果 qPCR验证HepG2细胞无OBSCN本底表达，慢病毒感染得到HepG2 H21157过表达稳转细胞系和HepG2 GL119对照空载体稳转细胞系；菌落PCR、质粒PCR 以及基因测序结果验证敲除重组质粒reOBSCN 构建成功，转染得到OBSCN 敲除的HepG2 OBSCN KO 稳转细胞系和对照空载体HepG2 ecas稳转细胞系；Western blot技术验证OBSCN敲除及过表达细胞系构建成功；CCK-8法结果显示OBSCN过表达加快了HepG2细胞增殖，差异有统计学意义，OBSCN基因的敲除可以减慢HepG2细胞增殖，差异有统计学意义；Transwell 小室法得到HepG2 H21157、HepG2 GL119 的迁移细胞数分别为150.30 ± 14.95、136.50 ± 15.02，HepG2 OBSCN KO、HepG2 ecas的迁移细胞数分别为112.70 ± 20.30、147.8 ± 11.55，差异有统计学意义。结论 OBSCN基因的过表达会加快HepG2肝癌细胞的增殖和迁移，OBSCN基因的敲除会减慢HepG2肝癌细胞的增殖和迁移。收起

文献类型

期刊

浏览量

22