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作者

朱杉 胡旭东 赵伟 王存良 陈元吉 苗传望

作者单位

³山东第一医科大学(山东省医学科学院)研究生部 ¹山东省耳鼻喉医院头颈放疗科山东大学 ²山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院)放疗科山东第一医科大学(山东省医学科学院)

刊名

中华肿瘤防治杂志

年份

2023

卷号

第30卷

期号

第21期

页码

1265-1271

ISSN

1673-5269

关键词

雷帕霉素不敏感的mTOR伴侣 食管鳞状细胞癌 增殖 抑制剂 JR-AB2-011

分类号

R735.1

摘要

目的 探讨RICTOR对食管鳞状细胞癌细胞增殖能力的影响，分析RICTOR在食管鳞状细胞癌中的生物学功能。方法 使用cBioPortal数据库分析RICTOR表达及对肿瘤患者预后的影响。采用siRNA干扰技术分别构建食管鳞状细胞癌细胞KYSE30和KYSE150的siRNA-NC、siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞，使用细胞计数试剂盒8和克隆形成实验检测各组细胞增殖和克隆形成能力的差异。慢病毒转染法构建KYSE30稳定敲降RICTOR的shRNA-RICTOR及shRNA-NC细胞，通过裸鼠皮下成瘤实验检测RICTOR敲降后对荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。蛋白质印迹法检测RICTOR下游靶蛋白的表达水平，并通过体外实验初步探究RICTOR抑制剂JR-AB2-011对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响。结果 数据库分析结果显示，RICTOR高表达与肿瘤患者预后差相关。CCK8检测结果显示，敲降RICTOR基因后第96 h,在KYSE30细胞系中，与siRNA-NC相比，siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞增殖能力降低，t值分别为33.51和47.13,...更多

目的 探讨RICTOR对食管鳞状细胞癌细胞增殖能力的影响，分析RICTOR在食管鳞状细胞癌中的生物学功能。方法 使用cBioPortal数据库分析RICTOR表达及对肿瘤患者预后的影响。采用siRNA干扰技术分别构建食管鳞状细胞癌细胞KYSE30和KYSE150的siRNA-NC、siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞，使用细胞计数试剂盒8和克隆形成实验检测各组细胞增殖和克隆形成能力的差异。慢病毒转染法构建KYSE30稳定敲降RICTOR的shRNA-RICTOR及shRNA-NC细胞，通过裸鼠皮下成瘤实验检测RICTOR敲降后对荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。蛋白质印迹法检测RICTOR下游靶蛋白的表达水平，并通过体外实验初步探究RICTOR抑制剂JR-AB2-011对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响。结果 数据库分析结果显示，RICTOR高表达与肿瘤患者预后差相关。CCK8检测结果显示，敲降RICTOR基因后第96 h,在KYSE30细胞系中，与siRNA-NC相比，siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞增殖能力降低，t值分别为33.51和47.13,均P＜0.001;在KYSE150细胞系中，与siRNA-NC相比，siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞增殖能力也降低，t值分别为16.14和20.48,均P＜0.001。克隆形成实验结果显示，在KYSE30细胞系中，与siRNA-NC相比，siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞克隆形成能力降低，t值分别为9.44和11.19,均P＜0.001;在KYSE150细胞系中，与siRNA-NC相比，siRNA1-RICTOR和siRNA2-RICTOR细胞克隆形成能力也降低，t值分别为22.41和21.66,均P＜0.001。裸鼠成瘤实验表明，在皮下接种后第5周，shRNA-RICTOR及shRNA-NC细胞成瘤后裸鼠肿瘤体积分别为和 mm~3,t=2.62,P=0.031。蛋白质印迹法检测结果显示，RICTOR参与调控AKT信号通路，敲降RICTOR的食管鳞状细胞癌细胞AKT Ser473位点磷酸化水平显著下调。此外，体外实验表明，RICTOR的抑制剂JR-AB2-011在0.25μmol/L浓度下培养KYSE30和KYSE150细胞72 h抑制细胞增殖，差异均有统计学意义，t值分别为39.64和28.22,均P＜0.001。结论 RICTOR可能是通过调控AKT信号通路影响食管鳞状细胞癌细胞增殖和克隆形成能力，抑制RICTOR信号通路具有潜在的抗肿瘤临床价值。收起

基金

山东省医药卫生科技发展计划项目;山东省自然科学基金

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

19