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作者

迟文英 李燕 杨忠波 黄亚茹 李俊发 孟凡军

作者单位

首都医科大学神经生物学系 山东第一医科大学附属中心医院麻醉科 山东第一医科大学附属颈肩腰腿痛医院麻醉科

刊名

中华麻醉学杂志

年份

2023

卷号

第43卷

期号

第8期

页码

951-956

ISSN

0254-1416

关键词

缺血预处理 吗啡 细胞低氧 神经元 自噬 JNK丝裂原活化蛋白激酶类

摘要

目的评价自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶的关系。方法选择出生24 h内的C57BL/6乳鼠，培养原代皮层神经元，采用随机数字表法分为9组：对照组、OGD/R组、吗啡预处理组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组、3-MA＋吗啡预处理组、自噬抑制剂氯喹组、氯喹＋吗啡预处理组、JNK抑制剂SP600125组和SP600125＋吗啡预处理组。吗啡预处理：OGD/R前加入吗啡3 μmol/L孵育2 h。3-MA组、Ch组和SP组分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP6001252 5 μmol/L，孵育150 min。3-MA＋M组、Ch＋M组和SP＋M组于吗啡预处理前30 min时分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP600125 25 μmol/L。随后氧糖剥夺1 h，复糖复氧24 h。采用CCK-8法测定神经元活力；Western blot法测定JNK、磷酸化JNK、微管相关蛋白1轻链3、p62、Beclin1、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达；LC3双荧...更多

目的评价自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶的关系。方法选择出生24 h内的C57BL/6乳鼠，培养原代皮层神经元，采用随机数字表法分为9组：对照组、OGD/R组、吗啡预处理组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组、3-MA＋吗啡预处理组、自噬抑制剂氯喹组、氯喹＋吗啡预处理组、JNK抑制剂SP600125组和SP600125＋吗啡预处理组。吗啡预处理：OGD/R前加入吗啡3 μmol/L孵育2 h。3-MA组、Ch组和SP组分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP6001252 5 μmol/L，孵育150 min。3-MA＋M组、Ch＋M组和SP＋M组于吗啡预处理前30 min时分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP600125 25 μmol/L。随后氧糖剥夺1 h，复糖复氧24 h。采用CCK-8法测定神经元活力；Western blot法测定JNK、磷酸化JNK、微管相关蛋白1轻链3、p62、Beclin1、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达；LC3双荧光腺病毒转染法计数自噬小体和自噬溶酶体；TUNEL染色法检测神经元凋亡率。结果与C组比较，OGD/R组神经元活力降低，Beclin1表达上调，p62表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、p-JNK/JNK比值、自噬小体计数、自噬溶酶体计数、cleaved-caspase-3/caspase-3比值和神经元凋亡率升高。与M组比较，M＋3-MA组神经元活力和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，p62表达上调，M＋Ch组神经元活力降低，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，p62表达上调，M＋SP组神经元活力、p-JNK/JNK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，p62表达上调，自噬小体计数和自噬溶酶体计数降低，Beclin1表达下调，cleaved-caspase-3/caspase-3比值和神经元凋亡率升高。结论吗啡预处理可通过激活JNK，增强自噬，抑制凋亡，减轻小鼠原代皮层神经元OGD/R损伤。收起

基金

山东省自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

15