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作者

孙瑞婧 王玉芳 王朝喆 吴沄桦 都鹏超 毕可红 姜国胜

作者单位

³山东第一医科大学(山东省医学科学院)第一附属医院血液科 ¹滨州医学院基础医学院免疫学教研室 ²烟台市福山区人民医院检验科

刊名

中华肿瘤防治杂志

年份

2023

卷号

第30卷

期号

第10期

页码

577-586

ISSN

1673-5269

关键词

白血病细胞 诱导分化 单核/巨噬细胞 miR-let-7c-5p c-myc

分类号

R733.7

摘要

目的 探讨miR-let-7c-5p/c-myc信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的调控作用。方法 采用PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1白血病细胞向单核/巨噬细胞定向分化，PBS作为对照组。诱导48 h后CCK8法测定细胞增殖水平；流式细胞仪测定细胞CD11b与CD14分化抗原表达水平；RT-qPCR检测白血病细胞分化前后miR-let-7c-5p和c-myc的表达变化；蛋白质印迹法检测c-myc蛋白表达变化；双荧光素酶结合实验检测miR-let-7c-5p与c-myc的3′UTR靶向结合和活性调控关系；转染miR-let-7c-5p mimic观察c-myc表达变化后细胞的增殖分化水平变化；过表达c-myc拯救实验观察miR-let-7c-5p对PMA+LPS+IFN-γ诱导的THP-1细胞增殖分化的影响。THP-1细胞转染miR-let-7c-5p inhibitor,观察c-myc表达变化对THP-1定向分化为M1样巨噬细胞的影响。结果 与PBS对照组相比，PMA+LPS+IFN-γ诱导48 h后，THP-1细胞的增殖能力明显降低。PMA+LPS+IFN-γ实验组...更多

目的 探讨miR-let-7c-5p/c-myc信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的调控作用。方法 采用PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1白血病细胞向单核/巨噬细胞定向分化，PBS作为对照组。诱导48 h后CCK8法测定细胞增殖水平；流式细胞仪测定细胞CD11b与CD14分化抗原表达水平；RT-qPCR检测白血病细胞分化前后miR-let-7c-5p和c-myc的表达变化；蛋白质印迹法检测c-myc蛋白表达变化；双荧光素酶结合实验检测miR-let-7c-5p与c-myc的3′UTR靶向结合和活性调控关系；转染miR-let-7c-5p mimic观察c-myc表达变化后细胞的增殖分化水平变化；过表达c-myc拯救实验观察miR-let-7c-5p对PMA+LPS+IFN-γ诱导的THP-1细胞增殖分化的影响。THP-1细胞转染miR-let-7c-5p inhibitor,观察c-myc表达变化对THP-1定向分化为M1样巨噬细胞的影响。结果 与PBS对照组相比，PMA+LPS+IFN-γ诱导48 h后，THP-1细胞的增殖能力明显降低。PMA+LPS+IFN-γ实验组的CD11b和CD14平均阳性表达率升高[%vs%,t=17.050,P＜0.001;%vs%,t=24.650,P＜0.001]。PMA+LPS+IFN-γ实验组的c-myc蛋白表达水平降低。PMA+LPS+IFN-γ实验组的miR-let-7c-5p基因表达量高于对照组，而c-myc基因表达量低于对照组，均P＜0.001。Luciferase实验证实，miR-let-7c-5p mimic+c-myc-WT组的荧光素酶活性明显低于mimics NC+c-myc-WT组。转染miR-let-7c-5p mimic后，miR-let-7c-5p mimic组的c-myc蛋白表达水平低于miR-let-7c-5p mimic NC组,伴有细胞增殖水平的降低,CD11b和CD14阳性表达率升高[%vs%,t=33.530,P＜0.001;%vs%,t=6.195,P=0.004]。拯救实验结果表明，miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组的c-myc蛋白表达水平高于miR-let-7c-5p mimics组。miR-let-7c-5p mimics组的THP-1细胞增殖D值低于miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组。miR-let-7c-5p mimics组的平均CD11b、CD14阳性表达率高于miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组[%vs%,t=3.865,P=0.018;%vs%,t=12.56,P＜0.001]。miR-let-7c-5p inhibitor干预PMA+LPS+IFN-γ实验组结果显示，与对照组相比较，PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1细胞分化后，c-myc蛋白的表达水平显著降低,CXCL9、CXCL10、iNOS基因的相对表达水平明显升高，均P＜0.001。与PMA+LPS+IFN-γ实验组相比较，PMA+LPS+IFN-γ+miR-let-7c-5p inhibitor组的c-myc蛋白相对表达水平显著升高,而CXCL9、CXCL10、iNOS基因的相对表达水平明显降低，均P＜0.001。结论 miR-let-7c-5p可以靶向结合c-myc 3′UTR区，miR-let-7c-5p/c-myc信号轴是白血病细胞定向分化为单核/巨噬细胞的重要途径之一。收起

基金

国家自然科学基金;山东省自然科学基金

学科

【教育部学科】医学

文献类型

期刊

浏览量

29