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作者

段豪云 李文静 贾艳妮 赵灿 周庆军 李宗义

作者单位

山东第一医科大学附属眼科研究所山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院) 山东第一医科大学附属眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

刊名

中华实验眼科杂志

年份

2022

卷号

第12期

ISSN

2095-0160

关键词

神经嵴 尼克酰胺 诱导分化 人胚胎干细胞

摘要

目的 探讨尼克酰胺在人胚胎干细胞诱导分化为神经嵴细胞过程中的作用，为hESCs进一步分化为角膜内皮细胞提供实验基础。 方法 取培养5～7 d的hESCs细胞系H1进行诱导，根据诱导培养基中干预组分的不同分为未添加NIC组、NIC添加组、NIC+白藜芦醇组和Sirtinol组，其中Res和Sirtinol分别为SIRT1活性激动剂和抑制剂，各组连续诱导7 d。采用实时荧光定量PCR法检测诱导1、3、5、7 d hESCs及神经嵴细胞标志物mRNA相对表达量；诱导后7 d，采用免疫荧光染色法测定hESCs来源神经嵴细胞相关标志蛋白的表达，采用流式细胞术分析hESCs来源神经嵴细胞表面标志物神经生长因子受体和人自然杀伤因子1阳性细胞比率，以评价NIC诱导效率及调控SIRT1对HNK-1表达的影响。 结果 与未添加NIC组相比，NIC添加组处理5 d后全能性基因八聚体结合转录因子4和同源域蛋白 mRNA相对表达量显著降低，神经嵴细胞标志物P75、HNK-1、SRY相关HMG盒9和SOX10 mRNA相对表达量显著升高，差异均有统计学意义。未添加NIC组、NIC添加组、NIC+Res组和Sirt...更多

目的 探讨尼克酰胺在人胚胎干细胞诱导分化为神经嵴细胞过程中的作用，为hESCs进一步分化为角膜内皮细胞提供实验基础。 方法 取培养5～7 d的hESCs细胞系H1进行诱导，根据诱导培养基中干预组分的不同分为未添加NIC组、NIC添加组、NIC+白藜芦醇组和Sirtinol组，其中Res和Sirtinol分别为SIRT1活性激动剂和抑制剂，各组连续诱导7 d。采用实时荧光定量PCR法检测诱导1、3、5、7 d hESCs及神经嵴细胞标志物mRNA相对表达量；诱导后7 d，采用免疫荧光染色法测定hESCs来源神经嵴细胞相关标志蛋白的表达，采用流式细胞术分析hESCs来源神经嵴细胞表面标志物神经生长因子受体和人自然杀伤因子1阳性细胞比率，以评价NIC诱导效率及调控SIRT1对HNK-1表达的影响。 结果 与未添加NIC组相比，NIC添加组处理5 d后全能性基因八聚体结合转录因子4和同源域蛋白 mRNA相对表达量显著降低，神经嵴细胞标志物P75、HNK-1、SRY相关HMG盒9和SOX10 mRNA相对表达量显著升高，差异均有统计学意义。未添加NIC组、NIC添加组、NIC+Res组和Sirtinol组HNK-1细胞比率分别为%、%、%和%，总体比较差异有统计学意义。 结论 NIC可通过抑制SIRT1的活性促进HNK-1表达，提高hESCs来源神经嵴细胞的分化效率，为神经嵴细胞相关疾病的治疗，如角膜内皮移植提供新的种子细胞来源。收起

基金

国家自然科学基金;山东省自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

44