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作者

刘晴 谢荣现 范丙乾 李冰清 贾海红

作者单位

山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)

刊名

中国病原生物学杂志

年份

2024

卷号

第19卷

期号

第3期

页码

270-274

ISSN

1673-5234

关键词

鼠伤寒沙门菌 HilD 原核表达 晶体培养

分类号

R378

摘要

目的 本研究将获取鼠伤寒沙门菌毒力转录调控因子HilD的蛋白，培养HilD蛋白晶体，为进一步分析HilD功能机制和靶向胞内沙门菌药物研发奠定基础。方法 以鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD生物信息学分析为基础，使用鼠伤寒沙门菌14028S菌株作为模板进行分子克隆，构建hilD-pGl01重组质粒，使用原核体系表达HilD,通过镍柱亲和层析柱和透析获取纯化蛋白。EMSA实验验证HilD活性。使用晶体培养试剂盒进行晶体培养。结果 成功构建了HilD原核表达系统，HilD是一种碱性蛋白，在蛋白提取过程中需要将缓冲液的pH值维持在7.0左右以维持HilD蛋白的稳定性，还需添加2%甘油和2%蔗糖进行保护。hilA能够稳定HilD蛋白，有利于晶体的生长。结论 成功获取HilD纯化蛋白，实验证明具有生物活性，培养出HilD与hilA启动子DNA的复合物晶体，复合物的培养为HilD结构解析奠定了基础。

基金

国家自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

14