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作者

张平 李贺 刘晓宇 李冰清 岳盈盈

作者单位

山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系

刊名

中国病原生物学杂志

年份

2024

卷号

第19卷

期号

第3期

页码

285-290，296

ISSN

1673-5234

关键词

粒细胞集落刺激因子 原核表达 蛋白纯化 亚细胞定位 感染免疫

分类号

R392

摘要

目的 粒细胞集落刺激因子作为免疫调控中的重要细胞因子，在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而，在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位，为重组CSF3药物开发以及揭示其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制奠定基础。方法 基于人CSF3的生物信息学分析，分别通过QuikChange和基因克隆获得CSF3 pGlO1和CSF3-pmCherry两种重组质粒。前者在大肠埃希菌原核表达系统中表达，并通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。后者通过jetPEI试剂转染到HEK-293T细胞中，48 h后通过荧光共聚焦显微镜观察，确定其亚细胞定位。结果 在原核系统中成功表达人CSF3蛋白，其相对分子质量为18.8×10~3。该蛋白的溶解性良好，PP酶酶切后蛋白浓度较高，但蛋白性质相对不稳定，对pH值和温度敏感，容易发生聚集和降解。将荧光融合质粒转染到HEK-293T细胞中48 h后观察，人CSF3-pmCherry蛋白定位在细胞质内，呈现出特定的定位和分布模式。结论 成功构建人CSF3原核表达系统，获得纯...更多

目的 粒细胞集落刺激因子作为免疫调控中的重要细胞因子，在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而，在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位，为重组CSF3药物开发以及揭示其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制奠定基础。方法 基于人CSF3的生物信息学分析，分别通过QuikChange和基因克隆获得CSF3 pGlO1和CSF3-pmCherry两种重组质粒。前者在大肠埃希菌原核表达系统中表达，并通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。后者通过jetPEI试剂转染到HEK-293T细胞中，48 h后通过荧光共聚焦显微镜观察，确定其亚细胞定位。结果 在原核系统中成功表达人CSF3蛋白，其相对分子质量为18.8×10~3。该蛋白的溶解性良好，PP酶酶切后蛋白浓度较高，但蛋白性质相对不稳定，对pH值和温度敏感，容易发生聚集和降解。将荧光融合质粒转染到HEK-293T细胞中48 h后观察，人CSF3-pmCherry蛋白定位在细胞质内，呈现出特定的定位和分布模式。结论 成功构建人CSF3原核表达系统，获得纯度较高的CSF3蛋白。通过荧光融合技术确定CSF3-pmCherry蛋白主要定位在HEK-293T细胞质。为重组CSF3药物的开发及其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制研究奠定了基础。收起

基金

国家自然科学基金;山东省自然科学基金

文献类型

期刊

浏览量

19