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作者

刘赛 付彬 李思迪 陈志达 张悦 郭中坤 王永安 王可洲

作者单位

山东朋悦实验动物科技有限公司 山东第一医科大学(山东省医学科学院)实验动物学院(省实验动物中心)

刊名

实验动物与比较医学

年份

2026

卷号

第2期

ISSN

1674-5817

关键词

肾上腺素受体α2A Lbp-/-小鼠 BRL-44408 maleate 丝裂原激活的蛋白激酶信号通路

分类号

Q95-33;R-332

摘要

目的 探究肾上腺素受体α2A调节脂多糖诱导脂多糖结合蛋白敲除小鼠原代肝细胞炎症的机制。方法 通过两步灌流法提取C57BL/6J小鼠和Lbp小鼠原代肝细胞，构建经LPS诱导的原代肝细胞体外炎症模型，同时通过腹腔注射LPS以构建炎症小鼠体内模型。将体外实验分为5组，即Control组、LPS组、BRL+LPS组、OE-NC+LPS组和OE-Adra2a+LPS组。其中，Control组为空白对照；LPS组加入LPS刺激原代肝细胞；BRL+LPS组加入BRL-44408 maleate预处理原代肝细胞后，再加入LPS；OE-NC+LPS组为加入空载病毒转染原代肝细胞后，再加入LPS；OE-Adra2a+LPS组为加入Adra2a过表达慢病毒转染原代肝细胞后，再加入LPS。同样，将体内实验分为5组，即Control'组、LPS'组、BRL+LPS'组、OE-NC+LPS'组、OE-Adra2a+LPS'组。其中，Control'组为空白对照；LPS'组为经腹腔注射LPS；BRL+LPS'组为经腹腔注射BRL-44408 maleate预处理小鼠后，再注射LPS；OE-NC+LPS'组为经腹腔注...更多

目的 探究肾上腺素受体α2A调节脂多糖诱导脂多糖结合蛋白敲除小鼠原代肝细胞炎症的机制。方法 通过两步灌流法提取C57BL/6J小鼠和Lbp小鼠原代肝细胞，构建经LPS诱导的原代肝细胞体外炎症模型，同时通过腹腔注射LPS以构建炎症小鼠体内模型。将体外实验分为5组，即Control组、LPS组、BRL+LPS组、OE-NC+LPS组和OE-Adra2a+LPS组。其中，Control组为空白对照；LPS组加入LPS刺激原代肝细胞；BRL+LPS组加入BRL-44408 maleate预处理原代肝细胞后，再加入LPS；OE-NC+LPS组为加入空载病毒转染原代肝细胞后，再加入LPS；OE-Adra2a+LPS组为加入Adra2a过表达慢病毒转染原代肝细胞后，再加入LPS。同样，将体内实验分为5组，即Control'组、LPS'组、BRL+LPS'组、OE-NC+LPS'组、OE-Adra2a+LPS'组。其中，Control'组为空白对照；LPS'组为经腹腔注射LPS；BRL+LPS'组为经腹腔注射BRL-44408 maleate预处理小鼠后，再注射LPS；OE-NC+LPS'组为经腹腔注射空载病毒预处理小鼠后，再注射LPS；OE-Adra2a+LPS'组为经腹腔注射Adra2a过表达慢病毒预处理小鼠后，再注射LPS。通过CCK-8法检测经抑制和过表达Adra2a后的小鼠原代肝细胞存活率，采用实时荧光定量PCR法检测抑制和过表达Adra2a后肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和IL-1β这3种炎症因子基因表达量的变化，采用蛋白质印迹法检测经LPS刺激后Adra2a蛋白表达量以及细胞外调节蛋白激酶1/2、p38丝裂原激活的蛋白激酶和c-Jun氨基末端激酶蛋白磷酸化的变化情况。结果 体外实验中，在LPS刺激下，与Control组相比，C57BL/6J小鼠原代肝细胞中Adra2a蛋白表达量显著下降，而Lbp小鼠原代肝细胞中Adra2a蛋白表达量却显著升高；与LPS组相比，BRL+LPS组细胞的存活率显著升高，TNF-α、IL-6和IL-1β基因转录水平显著降低，ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著降低；与OE-NC+LPS组相比，OE-Adra2a+LPS组细胞存活率显著下降，TNF-α、IL-6和IL-1β基因转录水平显著升高，ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著升高。体内实验中，与LPS'组相比，BRL+LPS'组小鼠肝脏组织中ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著降低；与OE-NC+LPS'组相比，OE-Adra2a+LPS'组小鼠肝脏ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著升高。结论 LPS可引起Lbp小鼠原代肝细胞Adra2a中蛋白表达量显著升高；Adra2a蛋白可以通过MAPK信号通路调节经LPS诱导的Lbp小鼠原代肝细胞炎症水平。收起

文献类型

期刊