pRluc-KOR真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
- 作者单位
- 山东农业大学生命科学学院 济宁医学院神经生物学实验室 泰山医学院基础部神经生物学实验室
- 刊名
- 第四军医大学学报
- 年份
- 2009
- 卷号
- 第30卷
- 期号
- 第18期
- 页码
- 1644-1646
- ISSN
- 1674-8913
- 关键词
- κ型阿片受体 真核表达载体 构建 生物发光共振能量转移
- 分类号
- R818.023
- 摘要
- 目的:构建与海肾萤光素酶(Rluc)融合的κ型阿片受体(KOR)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法(BRET)检测apelin受体和KOR之间的相互作用.方法:以质粒pcDNA3.1-KOR为模板,PCR方法扩增KOR.扩增的KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pRluc.将这两种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10.挑取菌落培养,提取质粒,行酶切鉴定及测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察.结果:扩增出了1条1143 bp的片段,与预期的KOR大小相符,质粒酶切结果显示pRluc-KOR被切成2条片段,其中一条为pRluc载体大小,另一条为目的片段大小.经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源.共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上.结论:构建成功了pRluc-KOR重组表达载体,此表达载体可用于检测KOR与apelin受体或与其他受体之间的相互作用.
- 基金 国家自然科学基金;山东省自然科学基金
- 学科
- 【教育部学科】医学
- 文献类型
- 期刊
- 浏览量
- 15
-
被引次数
看了本文的还看了
- [1] 武夏明;孙浩浩;张瑞泽;郭爽;李洪爽 . 5-硝基-2-磺酰基苯并呋喃的合成研究[J] 精细化工中间体 2016 . 第4期 . 32-35 .
- [2] 常海涛 . 一种苯并噁嗪树脂基碳气凝胶及其制备方法 [P]. CN106082170A . 2016.11.09 .
- [3] 李宜霏;王浩;倪伟;丁国永;高璐;姜宝法 . 湖南省洪涝灾害事件对居民心血管疾病死亡的影响[J] 环境与健康杂志 2015 . 第4期 . 287-290 .
- [4] 王倩倩;刘红;李媛;张建 . 合同制护士心理授权与离职意愿的相关性研究[J] 中国护理管理 2014 . 第5期 . 509-511 .
- [5] 吕海芹;周文;杜长江;吕树蕰 . 华法林的临床应用[J] 泰山医学院学报 2011 . 第6期 . 423-425 .
- [6] 潘洪伟;焦凤英 . 论毛泽东、邓小平的“四化”观[J] 重庆交通学院学报(社会科学版) 2006 . 第6卷 第1期 . 1-4 .
- [7] 孟宪锋 . 论医学院校分析测试中心的内涵建设[J] 中国医学装备 2007 . 第4卷 第10期 . 28-29 .
- [8] 程普斋;尹玉凤 . 眼睑畸胎瘤1例[J] 中国实用眼科杂志 1989 . 第7卷 第11期 . 52 .
- [9] 张颖;张立木;丁静;李同德;齐永秀;郝立勇 . 土茯苓中单宁含量的测定[J] 泰山医学院学报 2004 . 第25卷 第3期 . 212-213 .
- [10] 王伟学;董晓斌;赵浩;张雯 . 机械通气撤离新进展[J] 泰山医学院学报 2004 . 第25卷 第5期 . 483-485 .
- [11] 王淑娟 . 绒癌67例化疗的护理体会[J] 泰山医学院学报 1994 . 第15卷 第3期 . 233-316 .
相关文献
- [1] 王福庆;王庆宝;韩国新 . 含报告基因的凋亡素基因真核表达载体构建研究[J] 泰山医学院学报 2010 . 第8期 .
- [2] 朱靖;窦如海;金东庆;杨娜娜 . pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞的研究[J] 实验动物与比较医学 2008 . 第28卷 第5期 . 318-320 .
- [3] 朱靖;金东庆;李志彦;窦如海;杨娜娜 . 小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究[J] 实验动物与比较医学 2006 . 第26卷 第3期 . 152-154 .
- [4] 杨娜娜;朱靖;孟春花;杜立新 . 小鼠白血病抑制因子真核表达载体的构建及测序分析[J] 家畜生态学报 2006 . 第27卷 第1期 . 22-26 .
- [5] 朱靖;金东庆;窦如海;杨娜娜 . 小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究 : 中国实验动物学会第七届学术年会 [C].
- [6] 殷殷 . 人源GM-CSF、IL-4基因串联共表达重组克隆质粒构建与表达 [D]. 泰山医学院 . 2014 .
- [7] 刘海青;白波 . NTR1调节KOR负性作用机制的实验研究 : 第十八次全国行为医学学术会议 [C].
- [8] 刘含亮;孙敏敏;王红卫;李庆雷;杨春贵;高红莉;万文菊;王纪亭 . 溶藻弧菌热休克蛋白70基因真核表达载体的构建及鉴定[J] 中国病原生物学杂志 2011 . 第6卷 第12期 . 889-890,911 .
- [9] 王福庆 . 含报告基因的凋亡素基因真核表达载体构建研究 [D]. 泰山医学院 . 2008 .
- [10] 焦凤萍 . 单纯疱疹病毒2型gD模拟抗原表位的筛选及其真核表达载体的构建 [D]. 泰山医学院 . 2008 .
- [11] 杨娜娜;史卫峰;崔英杰;赵晓民;杜立新 . pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞条件的优化[J] 泰山医学院学报 2007 . 第28卷 第8期 . 586-588 .
相同作者单位文献
- [1] 李雅林;白波;陈京;刘有旺 . Apelin/APJ系统研究进展[J] 第四军医大学学报 2009 . 第30卷 第20期 . 2248-2251 .
- [2] 于鹏丽;白波;陈京; . apelin在血管生成中的作用[J] 医学研究杂志 2010 . 第39卷 第9期 . 19-22 .
- [3] 李雅林;白波;陈京 . 生物发光共振能量转移技术及其应用[J] 中国生物化学与分子生物学报 2009 . 第25卷 第12期 . 1077-1082 .
- [4] 白波;李雅林;刘海青;宋文刚 . 神经生物学教学中加强研究生创新能力的培养[J] 青岛大学医学院学报 2009 . 第3期 . 209 .
- [5] 白波;李雅林;刘海青;宋文刚 . 神经生物学教学中加强研究生创新能力的培养(摘要)[J] 青岛大学医学院学报 2009 . 第3期 . 209 .
- [6] 白波;李雅林;刘海青;宋文刚 . 神经生物学教学中加强研究生创新能力的培养[J] 青岛大学医学院学报 2009 . 第45卷 第3期 . 209 .
- [7] 姜红霞;王圣惠;薛庆节;闫艳春 . 甲基对硫磷降解菌Alcaligenes.sp.YcX-20的分离鉴定及降解性能研究[J] 农业环境科学学报 2005 . 第24卷 第5期 . 132-135 .
- [8] 高艳霞;苏延友;贾凤娟;李艳玲;苗增民;洒荣波;唐瑜菁;孙继政 . 超临界CO流体萃取及GC-MS联用技术优化提取和分析四叶参挥发油成分[J] 中国新药杂志 2015 . 第24卷 第14期 . 1665-1669 .
- [9] 顾洪雁;袁晓伟 . 一种热激PCR法高效鉴定重组克隆[J] 生物学杂志 2010 . 第2期 . 36-39 .
- [10] 姜红霞;聂永心;冀海伟;张显忠;王德才;赵雪梅 . 泰山野生白苏叶挥发油成分GC-MS分析与抑菌活性研究[J] 中草药 2011 . 第10期 . 1952-1955 .
- [11] 张丽青;周波;张庆乐;吴守林 . 絮凝剂产生菌的筛选及在偶氮染料废水处理中的应用[J] 环境与健康杂志 2009 . 第3期 . 192-195 .