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作者

张庆 陈祥贵

作者单位

四川成都6 西华大学生物工程学院 山东泰安 泰山医学院生物科学系

刊名

泰山医学院学报

年份

2008

卷号

第29卷

期号

第3期

页码

164-168

ISSN

1004-7115

关键词

Ercc6l 真核表达 P19胚胎癌细胞 RT-PCR

分类号

Q782

摘要

目的构建Ercc6l的正、反义真核表达载体,并在P19胚胎癌细胞内瞬时表达,在细胞学水平对基因功能进行初步研究。方法KpnⅠ/XhoⅠ双酶切pGEM-T-Ercc6l获得目的基因Ercc6l,将其克隆到同样经过双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)Myc His6,重组质粒pcDNA3.1(+/-)-Ercc6l经菌落PCR和双酶切鉴定;脂质体介导法体外瞬时转染正义载体至P19细胞,RT-PCR检测基因在细胞内的表达活性情况。结果重组质粒经菌落PCR和KpnⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定,表明真核表达载体构建正确;脂质体介导法瞬时转染正义载体至P19细胞后,检测表明转染细胞能够表达Ercc6l。结论成功构建了Ercc6l正、反义真核表达载体,其正义载体转染真核细胞后能在其中表达。

文献类型

期刊

浏览量

21